[發(fā)明專利]測(cè)序免疫組庫的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201480016198.0
• 申請(qǐng)日: 2014-03-14
• 公開（公告）號(hào): CN105189748B
• 公開（公告）日: 2021-06-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 愛德華·A·哈欽斯;海-姆·克里斯蒂娜·范
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 血統(tǒng)生物科學(xué)公司
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10;C12Q1/6874;C12Q1/6881
• 代理公司: 上海勝康律師事務(wù)所 31263
• 代理人: 樊英如;李獻(xiàn)忠

1.一種確定在受試者中的免疫組庫的多樣性的方法，其包括：

a.通過使用免疫球蛋白鏈或TCR鏈特異性引物以及逆轉(zhuǎn)錄酶，對(duì)從受試者的包含多種細(xì)胞類型的生物樣品獲得的mRNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄以產(chǎn)生包含3'端同聚尾巴的免疫球蛋白鏈或TCR鏈cDNA；

b.通過使用逆轉(zhuǎn)錄酶以及包含與所述同聚尾巴互補(bǔ)的3’端序列和包含通用序列以及無規(guī)分子標(biāo)簽的5’旁側(cè)序列的寡聚核苷酸來添加無規(guī)分子標(biāo)簽和通用序列到所述免疫球蛋白鏈或TCR鏈cDNA的3'端以形成延伸的cDNA，其中所述無規(guī)分子標(biāo)簽是至少9聚體的低聚物；

c.通過使用一種或多種免疫球蛋白鏈或TCR鏈特異性引物和包含測(cè)序平臺(tái)特定的旁側(cè)序列的通用序列特異性引物來擴(kuò)增所述延伸的cDNA，以產(chǎn)生多個(gè)分子標(biāo)記的免疫球蛋白鏈或TCR鏈核酸；

d.測(cè)序所述分子標(biāo)記的免疫球蛋白鏈或TCR鏈核酸，以產(chǎn)生多個(gè)測(cè)序閱讀；

e.分組具有相同分子標(biāo)記的測(cè)序閱讀并聚簇在相同組內(nèi)的序列；

f.針對(duì)每個(gè)簇構(gòu)建共有序列以產(chǎn)生共有序列的集合，其中所述共有序列的集合用于確定所述免疫組庫的多樣性。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述生物樣品是血液或血液成分。

3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述血液是外周全血。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述外周全血包含外周血單核細(xì)胞。

5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述血液基于細(xì)胞外或細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記物分類。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述免疫球蛋白鏈?zhǔn)侵劓溁蜉p鏈。

7.如權(quán)利要求6所述的方法，其中免疫球蛋白重鏈包含所述免疫球蛋白VDJ和恒定區(qū)。

8.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述TCR鏈?zhǔn)铅伶?、β鏈、γ鏈或δ鏈?/p>

9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述TCR鏈包含VJ和恒定區(qū)。