[發(fā)明專利]包含RAMP功能的通用蛋白質過表達標記及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201480014969.2
• 申請日: 2014-02-27
• 公開（公告）號: CN105143464B
• 公開（公告）日: 2017-06-30
• 發(fā)明（設計）人: 金根重;樸愿筫;劉成煥;李鎮(zhèn)永;李恩檳;閔思榮
• 申請（專利權）人: 全南大學校產(chǎn)學協(xié)力團
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;C12N15/63
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權代理有限公司11227
• 代理人: 苗堃,金世煜

1.一種翻譯速度調節(jié)用RAMP標記的制造方法，其包括：制作與宿主細胞相應的稀有密碼子表的步驟；將目標基因的DNA序列轉換為密碼子的步驟；分析所述制作的稀有密碼子表中的稀有密碼子在目標基因ORF即開放讀碼框中出現(xiàn)的頻率和位置的步驟；以及收集稀有密碼子并進行配置的步驟，

其中所述RAMP標記選自序列號1至序列號42。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中所述稀有密碼子的收集通過分析密碼子的頻率和同工受體tRNA基因數(shù)而實現(xiàn)。

3.根據(jù)權利要求2所述的方法，其中密碼子的頻率為0.5～3％，同工受體tRNA基因數(shù)為0～2個。

4.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中所述稀有密碼子的配置是按照在ORF中出現(xiàn)的順序進行配置。

5.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中在所述稀有密碼子之間配置偏愛密碼子。

6.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中宿主細胞選自大腸菌、酵母、中國倉鼠卵巢細胞、人類細胞及植物細胞。

7.根據(jù)權利要求6所述的方法，其中宿主細胞選自大腸菌K-12、釀酒酵母、CHO-K1、HEK 293t及326-GFP。

8.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，目標基因是編碼不表達和難表達之蛋白質的基因。

9.根據(jù)權利要求8所述的方法，其特征在于，基因編碼酯酶、β-葡萄糖苷酶、溶細胞素A即ClyA、重組抗體單鏈Fv即scFv、天冬酰胺酶B、四-細胞粘附分子即T-CAM、B3(Fv)PE38、氯霉素乙酰基轉移酶即CAT、新普魯蘭酶、白細胞介素-1、白細胞介素-32、抗B淋巴細胞抗原CD20即抗-CD20抗體、和抗腫瘤壞死因子α即抗-TNFα。

10.一種翻譯速度調節(jié)用RAMP標記，其利用權利要求1～8中任一項所述的制造方法來制造，其中所述RAMP標記選自序列號1至序列號42。

11.一種增加在宿主細胞中不表達和難表達之蛋白質的表達效率的方法，其包括：在宿主細胞中收集稀有密碼子的步驟；構成針對目標基因的RAMP標記的步驟；制造包含RAMP標記和目標基因的表達載體的步驟；用表達載體對宿主細胞進行轉化的步驟；將在適合表達蛋白質的培養(yǎng)基中轉化的宿主細胞進行培養(yǎng)的步驟，

其中所述RAMP標記選自序列號1至序列號42。

12.根據(jù)權利要求11所述的方法，其中所述稀有密碼子的收集通過分析密碼子的頻率和同工受體tRNA基因數(shù)而實現(xiàn)。

13.根據(jù)權利要求12所述的方法，其中密碼子的頻率為0.5～3％，同工受體tRNA基因數(shù)為0～2個。

14.根據(jù)權利要求11所述的方法，其中所述RAMP標記構成是按照稀有密碼子在目標基因中出現(xiàn)的順序來實現(xiàn)。

15.根據(jù)權利要求11所述的方法，其中在所述稀有密碼子之間配置偏愛密碼子。

16.根據(jù)權利要求11所述的方法，其中所述宿主細胞選自大腸菌K-12、釀酒酵母、CHO-K1、HEK 293t及326-GFP。

17.根據(jù)權利要求11所述的方法，其中目標基因是編碼不表達和難表達之蛋白質的基因。

18.根據(jù)權利要求17所述的方法，其中所述基因編碼酯酶、β-葡萄糖苷酶、溶細胞素A即ClyA、重組抗體單鏈Fv即scFv、天冬酰胺酶B、四-細胞粘附分子即T-CAM、B3(Fv)PE38、氯霉素乙酰轉移酶即CAT、新普魯蘭酶、白細胞介素-1、白細胞介素-32、抗B淋巴細胞抗原CD20即抗-CD20抗體、抗腫瘤壞死因子α即抗-TNFα。

19.根據(jù)權利要求11所述的方法，其中RAMP標記配置成融合于目標基因的5'或3'，或者配置成導入到目標基因的內部，或者配置成獨立地進行翻譯。

20.根據(jù)權利要求11所述的方法，其中RAMP標記進一步與其它標記或融合蛋白質一起使用。

21.根據(jù)權利要求20所述的方法，其中所述其它標記為選自His標記、T7標記、S-標記、Flag-標記、HA-標記、V5表位、PelB及Xpress表位中的1種以上。