[發明專利]通過直接MALDI/MS檢測干液斑中化合物的方法

有效

• 申請號: 201480014782.2
• 申請日: 2014-03-13
• 公開（公告）號: CN105074471B
• 公開（公告）日: 2017-07-04
• 發明（設計）人: 瑪利亞·達洛亞;尼古拉斯·斯馬爾賈索;戴爾芬·德布瓦;埃德溫·德·波夫
• 申請（專利權）人: 智圖公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京律和信知識產權代理事務所(普通合伙)11446
• 代理人: 武玉琴,冷文燕

技術領域

本發明涉及存在于生物體液中至少一種化合物的檢測方法，尤其涉及存在于干液斑中至少一種化合物的檢測和/或鑒定方法。本發明還涉及一種用于分析干液斑中化合物空間分布的方法。本申請描述了用于干液斑分析的新方法。

背景技術

液體分析目前主要在液態樣本上進行。這樣的液態樣本不便于運輸，而且分子化合物的完整性不能長期保持。為了便于運輸和更長時間的保存，液體可以在合適的載體上進行干燥。例如，干血紙片法(或DBS)是最小血液取樣技術，其包括滴加至少一個小血滴到紙載體上。通常，該紙載體被特別設計為能夠吸收小血滴以用于進一步分析。在送入分析實驗室之前，血斑允許在室溫下風干幾個小時。少量的血液樣本和試樣的易于處理造就了DBS取樣技術的成功。此外，它允許簡化存儲和廉價運輸。它的成功始于20世紀60年代，那時羅伯特·蓋斯瑞(Robert Guthrie)博士開發出來了用于苯丙酮尿癥檢測的化驗。從那以后，“Guthrie卡”已在新生嬰兒篩查中被全世界采用。利用纖維素載體血液取樣(用少量血液的微創技術)的優點是特別適合于兒科患者，但對于臨床前及臨床研究(3R原則：減少，替代和優化)同樣有吸引力。目前，干斑取樣技術的使用被推廣到其他生物體液，如血清，血漿或尿液。

例如，新生兒篩查和藥理活性都采用質譜(或MS)技術用于干血斑分析。直到最近，在液體介質中萃取和分離的幾個步驟仍然是必要的；導致在MS分析可進行之前有一個較長時間的樣本制備。取自干血斑樣本的少許(分析物)的液體萃取通常使用水溶劑或有機溶劑的混合物進行，接著是液相色譜(LC)分離。由于液體萃取的步驟和/或分離的步驟存在，樣本被污染和/或存在于樣本中的化合物被破壞可能在這些步驟當中的一個步驟中發生。為了規避這些樣本制備和操作的問題，而這在診斷和制藥領域中極為重要，新的、直接的技術發展起來了(綜述見Déglon et al.,2012[Anal Bioanal Chem 2012,402:2485-2498])。技術的發展主要集中在通過直接洗脫(例如在線液體萃取)或直接解吸/電離進行DBS快速分析。后一方法是最快的解決方案(無需預處理)，特別適合于高通量的干液斑分析。在這樣的背景下，提出了一些從不同的基本電離技術發展而來的敞開式MS方法：解吸電噴霧電離(DESI)和電噴霧電離(ESI)中的紙噴霧電離(PSI)，氣體放電電離(GDI)中的實時直接分析(DART)和電子電離(EI)中的常壓熱解吸化學電離(APTDCI)。

這些MS方法用來分析不同的干液斑，但出現了主要的限制。例如，干血斑中的分析物分布可能受到幾種因素的影響，如血斑大小、紅細胞壓積水平和擴散性質(色層效應)。通過直接解吸/電離的分析物化驗，可能會被這些因素所影響。分析物分布成像是指導這些分析物化驗的有效方法。然而，干血斑中的分析物分布成像(在上述MS方法中)已經完成。放射自顯影的靈敏度和分辨率都還不足以進行可靠的分析。因此，由于成像方法的低靈敏度和/或低分辨率，分析干液斑樣本的直接解吸/電離方法會受到限制，從而導致分析物檢測不夠精確。樣品制備和隨后的分析仍然是基本問題，其限制了這些方法在干液斑分析領域的應用。

因此，需要一種簡單、快速且可靠但無需預處理的方法來檢測存在于干液斑中的化合物。此外，還需要一種不使用特定標簽，允許存在于干液斑中化合物成像，同時具有高靈敏度和高質量分辨率，而對生物污染物不太敏感的MS方法。

發明內容

因此在這個背景下，本發明的目的是通過提供一種檢測存在于液體樣本中至少一種化合物的方法，至少部分地解決目前現有技術中存在的問題，優選地，該方法沒有液體萃取步驟，最終通過印跡步驟，其可以保持存在于干液斑中化合物的空間分布，并允許通過分子成像工具進一步測定它們的空間分布。

根據本發明的一個方面，提供了一種檢測存在于生物體液中至少一種化合物的方法，所述方法包括以下步驟：

步驟a，在載體上提供至少一個干液斑；

步驟b，固定在所述載體上的所述干液斑的至少一部分到導電表面上；

步驟c，提供紫外光吸收化合物的水溶液或有機溶液；

步驟d，將所述紫外光吸收化合物沉積到固定在所述導電表面上的所述載體上干液斑的至少一部分上；

步驟e，使載體上所述干液斑的至少一個區域經受基質輔助激光解吸/電離過程以產生離子；

步驟f，用質譜儀分析儀獲取所述離子的全掃描模式質譜，和

步驟g，通過分析所述全掃描模式質譜確定至少一種化合物的存在。