[發(fā)明專利]一種TRAIL穿膜肽樣突變體、制備方法及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201480001787.1
• 申請(qǐng)日: 2014-10-10
• 公開（公告）號(hào): CN105555799B
• 公開（公告）日: 2020-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳守春;閆娟;徐琦;胡海洋;黃先洲;魏利佳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 成都華創(chuàng)生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/705
• 分類號(hào): C07K14/705;C12N15/12;C12N15/70;C12N15/10;A61K38/17;A61P35/00
• 代理公司: 北京聯(lián)瑞聯(lián)豐知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11411
• 代理人: 曾少麗

提供了一種TRAIL突變體，所述突變體為野生型TRAIL蛋白胞膜外段的第114?281位氨基酸序列的截短體，其中所述截短體的第114?121位氨基酸突變?yōu)?個(gè)精氨酸，所述TRAIL突變體用于治療腫瘤。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程藥物領(lǐng)域，特別涉及一種TRAIL穿膜肽樣突變體、制備方法及應(yīng)用，本發(fā)明TRAIL突變體對(duì)于多種不同類型的腫瘤具有優(yōu)越的治療作用，是極具潛力的新一代高效誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡藥物。

背景技術(shù)

1、Apo 2L/TRAIL用于腫瘤治療的進(jìn)展與意義

腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand，TRAIL)為腫瘤壞死因子(Tumor necrosis factor，TNF)超家族的成員，其基因序列分別于1995年由Wiley等人和1996年由Pitti等人獨(dú)立克隆獲得，后者將其命名為凋亡素2配體(Apo 2Ligand，Apo 2L)。后來(lái)的研究證實(shí)，Apo 2L與TRAIL實(shí)質(zhì)上是同一種蛋白質(zhì)，因此習(xí)慣上可將其稱為Apo 2L/TRAIL。TRAIL的功能首先是作為生物體先天性或獲得性免疫的調(diào)節(jié)劑，其次在細(xì)胞外源性凋亡途徑中作為免疫監(jiān)視發(fā)揮抗腫瘤的作用。TRAIL的最大優(yōu)點(diǎn)是可以選擇性地誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞凋亡而對(duì)正常細(xì)胞幾乎沒(méi)有毒性。研究資料表明，無(wú)論在體外還是體內(nèi)Apo 2L/TRAIL對(duì)于各種來(lái)源的人腫瘤細(xì)胞系，包括結(jié)(直)腸癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、腎癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、甲狀腺癌、淋巴瘤、白血病以及多發(fā)性骨髓瘤等都具有誘導(dǎo)凋亡的作用。

從發(fā)現(xiàn)至今的近20年時(shí)間里，TRAIL一直被作為一種重要的潛在抗腫瘤藥物開發(fā)，TRAIL的臨床實(shí)驗(yàn)在國(guó)外已進(jìn)入Ⅱ期，在國(guó)內(nèi)已完成Ⅲ期。大量體內(nèi)外試驗(yàn)均證實(shí)，TRAIL具有腫瘤特異性細(xì)胞毒性，尤其當(dāng)它與小劑量化療藥物聯(lián)用時(shí)即表現(xiàn)出明顯的協(xié)同和增效作用。相反，研究發(fā)現(xiàn)機(jī)體中凋亡機(jī)制的缺失導(dǎo)致的TRAIL耐受與腫瘤細(xì)胞的快速生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移明確相關(guān)。

腫瘤是一組高度異質(zhì)性的疾病，傳統(tǒng)上按照組織器官、病理改變的分型方法已經(jīng)不適合腫瘤的診療，目前的研究方向在于闡明不同腫瘤細(xì)胞的基因表達(dá)、分子分型，給予患者更具針對(duì)性的治療。對(duì)于抗腫瘤藥物認(rèn)識(shí)的深入使人們了解到，無(wú)論細(xì)胞毒性藥物、分子靶向藥物還是單克隆抗體，其發(fā)揮作用的過(guò)程中均涉及到腫瘤細(xì)胞凋亡途徑的激活，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的信號(hào)通路途徑是這些藥物發(fā)揮作用的樞紐和中心環(huán)節(jié)，而凋亡逃避正是腫瘤發(fā)生發(fā)展以及耐藥的重要機(jī)制。

2、Apo 2L/TRAIL用于腫瘤治療的缺陷和對(duì)策

最近進(jìn)展顯示，僅依賴Apo 2L/TRAIL治療多種不同類型的腫瘤仍是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的。盡管重組人Apo 2L/TRAIL或TRAIL受體DR₄/DR₅的激動(dòng)性單克隆抗體在Ⅰ期臨床治療中取得令人鼓舞的結(jié)果，但在隨后進(jìn)行的Ⅱ期臨床研究中卻沒(méi)有顯示出明確的臨床受益。大量研究表明，正常細(xì)胞以及大約一半(甚至高達(dá)60％)以上的傳代腫瘤細(xì)胞株對(duì)TRAIL表現(xiàn)出耐藥。根據(jù)Roberta di peitro和Giorgia zauli的綜述，Apo 2L/TRAIL對(duì)已經(jīng)研究的92株原代或傳代腫瘤細(xì)胞中的61株敏感，敏感率為66.3％，而對(duì)其余的31株耐藥，耐藥率為33.7％。TRAIL對(duì)正常細(xì)胞的耐受有著其生理意義，TRAIL在體內(nèi)保持著精準(zhǔn)的調(diào)控，只在生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中清除衰老退化和轉(zhuǎn)化細(xì)胞中發(fā)揮作用，而不至于對(duì)正常細(xì)胞產(chǎn)生殺傷。幾乎所有的TRAIL敏感腫瘤細(xì)胞在其凋亡信號(hào)通路中的各個(gè)環(huán)節(jié)和因素均具有相似的完整和功能，而每一種TRAIL耐藥腫瘤細(xì)胞均在凋亡信號(hào)通路中的一些環(huán)節(jié)和因素存在缺陷和變異，這些缺陷和變異使得這些耐藥的腫瘤細(xì)胞凋亡閾值異常升高，較易逃避凋亡清除，從而持續(xù)生長(zhǎng)增殖。