[發明專利]一種裂蓋馬鞍菌人工菌種的分離培養方法

有效

• 申請號: 201410856733.5
• 申請日: 2014-12-25
• 公開（公告）號: CN104521567A
• 公開（公告）日: 2015-04-22
• 發明（設計）人: 陳恒雷;馮光文
• 申請（專利權）人: 新疆大學
• 主分類號: A01G1/04
• 分類號: A01G1/04
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

1.一種裂蓋馬鞍菌人工菌種的分離培養方法，其特征在于：裂蓋馬鞍菌子實體和生長基質的原產地采集和收集：五一期間是新疆裂蓋馬鞍菌大量發生、子實體發育成熟的季節，趕赴距巴楚縣城30余公里的夏河和夏瑪勒胡楊林場跟隨當地采菇經驗豐富的維吾爾族老鄉深入林間尋找發育成熟的裂蓋馬鞍菌子實體，用經過121℃滅過菌的大鑷子從沙土中夾取出裂蓋馬鞍菌子實體，用吹風機對附著在子實體上的沙土進行清理，清理干凈后再用醫用剪刀將裂蓋馬鞍菌帶有泥土的須根剪除，并將菌蓋和菌柄剪開，將菌柄投入裝有80mL?75％酒精的150mL三角瓶中殺菌3min，然后用鑷子將菌柄撈出與菌蓋分別放入事先準備好的無菌空白培養皿中，并一起放入四周裝有冰袋的苯板保鮮箱中，最后用聚丙烯袋收集子實體發生地周圍的生長基質，并用標記筆在培養皿、袋體上做上一一對應的編號、時間、采集地、采集人等信息，其它子實體和生長基質的采集和收集方法同上；子實體的輻照處理和組織分離：將上述經過就地無菌處理并于第二天運返實驗室裝有裂蓋馬鞍菌菌柄和菌蓋的培養皿置于⁶⁰Coγ源輻照室分別用1.0KGy和0.5KGy的劑量進行輻照處理，然后移至接種室靜置2h后在超凈工作臺上對菌柄進行組織分離，在酒精燈火焰的保護下將裝有菌柄的培養皿蓋打開呈45度角并用醫用剪刀在裂蓋馬鞍菌菌柄中部剪取組織塊；菌絲體的平板培養：用無菌接種鉤分別挑取經醫用剪刀分離的裂蓋馬鞍菌菌柄中部組織塊一一接種于裝有優化平板培養基的培養皿中心處，置于人工氣候箱中25℃恒溫培養12h、20℃恒溫培養12h，以此類推培養10d，挑選菌絲體活力旺盛、長勢良好的平板置于冰柜4℃低溫保藏以備后續研究之用，其中，優化平板培養基的質量體積百分比為：馬鈴薯煮汁20％、麩皮煮汁1.5％、蔗糖2.0％、蛋白胨1.0％、KH₂PO₄?0.2％、MgSO₄?0.15％、瓊脂1.8％，其余為自來水，pH值滅菌前8.5，121℃滅菌30min；菌絲體的種瓶培養：用無菌接種鉤挑取1朵經輻照處理的裂蓋馬鞍菌菌蓋，接種到裝有350mL種瓶培養基的500mL廣口瓶中，置于人工氣候箱中將1d每隔6h設為一段，對應的培養溫度分別設為27℃、23℃、19℃、15℃，如是仿生變溫培養30d，挑選菌絲體長勢旺盛的種瓶置于冰柜4℃低溫保藏以備后續栽培之用，其中，種瓶培養基的質量體積百分比為：裂蓋馬鞍菌發生基質27％、木屑粉10％、麩皮6.7％、白砂糖1.0％、KH₂PO₄?0.2％、MgSO₄?0.1％、，其余為自來水，pH值滅菌前8.5，121℃滅菌30min。