[發明專利]油藏中微生物菌體的提取方法及分析方法

在審

• 申請號: 201410855816.2
• 申請日: 2014-12-31
• 公開（公告）號: CN104560824A
• 公開（公告）日: 2015-04-29
• 發明（設計）人: 馬德勝;宋文楓;魏小芳;吳康云
• 申請（專利權）人: 中國石油天然氣股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;E21B43/22;E21B43/34
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 韓蕾

技術領域

本發明屬于油田采油技術領域，具體涉及一種油藏中微生物菌體的提取方法及分析方法，能直接從原油中提取微生物，保證在含水極低的油藏中依然可以對油樣中的微生物進行充分提取和分析。

背景技術

微生物提高采收率相關技術，從1976年提出至今，經過30年的發展，已成為繼化學驅油、氣體驅油、熱力驅油后的第四種驅油、提高原油采收率的方法。油藏中的微生物大多以碳源(蜜糖、烷烴)為其生長和繁殖的營養物。只要這些營養物質充足，微生物就能源源不斷地生產有利于提高石油采收率的代謝產物。微生物提高采收率技術的機理主要有以下五種：

1)微生物在代謝過程中產生有機酸：這些酸可以溶解油層中碳酸鹽巖，提高地層滲透作用；

2)微生物在代謝過程中產生氣態物質：主要包含甲烷、氫氣二氧化碳、硫化氫等，這些氣體在油層中聚集提高地層壓力，增大驅油能力，起到了氣體混相驅或非混相驅的作用；

3)微生物在代謝過程中產生生物表面活性劑和生物乳化劑：主要成分為脂肪酸及其脂類，降低稠油分子粘度，增加原油流動性；

4)微生物繁殖產生生物聚合物：微生物產生的聚合物主要是多糖，它們能選擇性地堵塞地層大孔道，提高注水波及體積系數，提高驅油效率；

5)微生物產生溶解地層原油的溶劑：包含有丙醇、丁醇、丙酮、甲醛等，這些溶劑可以將地層原油稀釋，提高單位時間的石油產量。

在微生物采油技術中，主要是通過微生物的篩選，甄別并判定在油藏開采中的有益菌和有害菌。對有益菌根據其功能研究和了解其在提高采收率上的作用和機理；而對于有害菌，則通過相關研究制定防范和控制措施。但是所有這些相關的研究，最初始和最關鍵步驟就是油藏中菌群的提取。不同樣品中提取微生物的難易度以及微生物種類的多樣性，將直接關系和影響到后期一些列微生物的相關研究。

目前國內外在微生物提高采收率方面的研究中，對油藏中菌群的提取都是基于對油樣中所含水里的微生物進行提取。而油田樣品大多是油水混合物，加上聚合物驅油后產生了很多懸浮物，或者當待分析的原油中自然分水量較少時(例如稠油油藏)，都會出現樣品很難進行油水分離的情況，這就完全限制了微生物的提取。此外，油藏樣品中菌濃較低，而且很多菌種都是分布在油水界面上，油樣直接進行油水分離會使一部分菌種丟失，從而影響微生物多樣性分析結果。

文獻“油藏微生物多樣性的分子生態學研究進展”(李輝等，《微生物學通報》，2008年5月，第35卷第5期，803-808頁)公開了一種油藏微生物的收集方法，其中記載了先用極性較弱的有機溶劑洗滌萃取油類物質，使細胞體盡量轉入水相中，再用冷凍超速離心方法收集大部分細胞體，以最大限度地收集到樣品中的微生物細胞。然而，此方法是用有機溶劑萃取(確切來說不是萃取，而是富集)，這樣是能將原油中的少量菌提出DNA，但是有機溶劑是養料，細菌接觸后會生長，這將破壞整個菌落的分布狀況和分布比例。利用該方法收集到的油藏微生物，可以用來分析油藏菌落多樣性，但由于油藏原始菌落分布已被后期生長破壞了，并無法分析原始菌落的分布比例。

因此，如能有效地從油藏中充分提取菌群并保持原始菌群分布狀況，對于促進油藏微生物研究發展具有重大意義。

發明內容

本發明的主要目的在于針對現有技術中難以有效從油藏特別是含水量較少的原油中全面提取微生物并保持原始菌群分布狀況的缺失，提供一種能直接從原油中提取微生物、保證在含水極低的油藏中依然可以對油樣中的微生物進行較全面的充分提取并且能保持原始菌群分布狀況的方法。

本發明的另一目的在于提供一種油藏中微生物菌體的分析方法。

為實現上述目的，本發明提供了一種油藏中微生物菌體的提取方法，該方法包括步驟：

1)配制微生物萃取液，每升該萃取液的組成為：K₂HPO₄0.3～0.5g，KH₂PO₄0.25～0.4g，MgSO₄0.1～0.3g，MnSO₄1.5～2.5mg，Fe₂(SO₄)₃2.0～3.0mg，NaCl?0.1～0.2g，檸檬酸鈉0.3～0.6g，葡萄糖0.8～1.2g，水余量；

2)將微生物萃取液與油藏樣品按照1:0.5～3的體積比混合，充分振蕩接觸；使萃取液可以很好的和微生物接觸；