[發明專利]一種從啤酒酵母中提取的奧古蛋白

在審

• 申請號: 201410854458.3
• 申請日: 2014-12-31
• 公開（公告）號: CN104593337A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發明（設計）人: 陳光;胡少雄;馬愛瑩
• 申請（專利權）人: 唯美度科技（北京）有限公司
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種從啤酒酵母中提取的奧古蛋白，其特征在于，所述奧古蛋白由包括以下步驟的方法制備而成：

1)將啤酒酵母溶解于磷酸鹽緩沖液中，所述磷酸鹽緩沖液的pH值為6.5～6.7，濃度為0.04～0.06mol/L；在1000～2000bar條件下高壓均質，循環5～10次，離心，取上清液；加入硫酸銨靜置、離心、收集沉淀；

2)將步驟1)所得沉淀溶解于磷酸鹽緩沖液中，所述磷酸鹽緩沖液的pH值為6.5～6.7，濃度為0.02～0.03mol/L，將所得溶液加入平衡好的葡聚糖凝膠柱Sephadex?G-25頂端，用本步驟所述磷酸鹽緩沖液進行洗脫；收集含有蛋白質且不含硫酸銨的洗脫液，濃縮，得濃縮液；

3)在步驟2)所得濃縮液加入平衡好的金屬螯合親和柱頂端，用檸檬酸緩沖液進行洗脫，所述檸檬酸緩沖液的pH值為4.5～6.0，濃度為0.02～0.03mol/L；收集含有蛋白質的洗脫液，濃縮，冷凍干燥，即得奧古蛋白。

2.根據權利要求1所述的從啤酒酵母中提取的奧古蛋白，其特征在于，步驟1)所述磷酸鹽緩沖液的濃度為0.05mol/L，pH值為6.6。

3.根據權利要求1所述的從啤酒酵母中提取的奧古蛋白，其特征在于，步驟1)所述加入硫酸銨靜置、離心、收集沉淀具體為：將硫酸銨以質量體積比0.3～0.5:1溶解于上清液中，靜置30～60min，在2～4℃、8000～9000rpm條件下離心15～30min，分離上清液，收集沉淀；將硫酸銨以質量體積比0.7～0.9:1加入所得上清液中，靜置15～45min，在2～4℃、8000～9000條件下離心15～30min，收集沉淀；將兩次收集所得的沉淀合并。

4.根據權利要求1所述的從啤酒酵母中提取的奧古蛋白，其特征在于，步驟2)所述磷酸鹽緩沖液的濃度為0.025mol/L，pH值為6.6。

5.根據權利要求1所述的從啤酒酵母中提取的奧古蛋白，其特征在于，步驟3)所述檸檬酸緩沖液的濃度為0.025mol/L，pH值為5.2。

6.根據權利要求1～5任意一項所述的從啤酒酵母中提取的奧古蛋白，其特征在于，步驟3)還包括以下步驟：在步驟2)所得濃縮液中，加入0.5～0.8mol/L?NaCl。

7.根據權利要求1所述的從啤酒酵母中提取的奧古蛋白，其特征在于，所述奧古蛋白由包括以下步驟的方法制備而成：

1)將啤酒酵母溶解于磷酸鹽緩沖液中，所述磷酸鹽緩沖液的pH值為6.5～6.7，濃度為0.04～0.06mol/L；在1000～2000bar條件下高壓均質，循環5～10次，在2～4℃、1000～5000rpm條件下離心5～15min，取上清液；將硫酸銨以質量體積比0.3～0.5:1溶解于上清液中，靜置30～60min，在2～4℃、8000～9000rpm條件下離心15～30min，分離上清液，收集沉淀；將硫酸銨以質量體積比0.7～0.9:1加入所得上清液中，靜置15～45min，在2～4℃、8000～9000條件下離心15～30min，收集沉淀；將兩次收集所得的沉淀合并；

2)將步驟1)所得沉淀溶解于磷酸鹽緩沖液中，所述磷酸鹽緩沖液的pH值為6.5～6.7，濃度為0.02～0.03mol/L，將所得溶液加入平衡好的葡聚糖凝膠柱Sephadex?G-25頂端，用本步驟所述磷酸鹽緩沖液進行洗脫；收集含有蛋白質且不含硫酸銨的洗脫液，濃縮，得濃縮液；

3)在步驟2)所得濃縮液中加入0.5～0.8mol/L?NaCl溶解，將所得溶液加入平衡好的金屬螯合親和柱頂端，用檸檬酸緩沖液進行洗脫，所述檸檬酸緩沖液的pH值為4.5～6.0，濃度為0.02～0.03mol/L；收集含有蛋白質的洗脫液，用PEG4000濃縮，冷凍干燥，即得奧古蛋白。