[發明專利]一種從啤酒酵母中提取的奧古蛋白

在審

• 申請號: 201410854458.3
• 申請日: 2014-12-31
• 公開（公告）號: CN104593337A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發明（設計）人: 陳光;胡少雄;馬愛瑩
• 申請（專利權）人: 唯美度科技（北京）有限公司
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術領域

本發明涉及活性蛋白的提取，具體涉及一種從啤酒酵母中提取的奧古蛋白。

背景技術

奧古蛋白(Orgotein)是由豬、牛、羊的肝和紅細胞等組織為原料分離提取而制得的一種水溶性蛋白質，為一種肽鏈大分子金屬酶。在生物學領域，具有消炎等功效，目前，正被越來越多地應用到化妝品領域。奧古蛋白多存在于生物體中，人工合成具有很大難度，因此，選擇適合的提取原料和相應的提取方法，獲得奧古蛋白，從而解決奧古蛋白的來源問題以適應對其大量的需求，是本領域目前需要解決的問題。

啤酒酵母是生產啤酒過程中的關鍵原料，其中含有大量的奧古蛋白成分。并且，在啤酒的生產過程中會產生大量廢啤酒酵母，目前有很多生產企業對啤酒生產過程中產生的廢啤酒酵母進行再利用，將啤酒廢啤酒酵母進行提純、復壯、擴大培養后，作為原料用于提取各種活性物質。綜上所述，啤酒酵母或廢啤酒酵母中奧古蛋白含量豐富，且具有大量的資源，是用來提取奧古蛋白的理想原料。

專利文獻CN1800377A公開了一種用釀酒酵母菌體提取純化得到銅/鋅超氧化物歧化酶的方法。所述的用釀酒酵母菌體提取純化銅/鋅超氧化物歧化酶的生產工藝過程是：將釀酒酵母菌體經過破壁提酶，丙酮二次沉淀，DEAE-32纖維素柱層析得到純化精制的酶。經比較和研究可知，現有技術提供的從酵母中提取奧古蛋白的工藝中，丙酮沉淀仍是其中的關鍵環節。如本領域技術人員所熟知的，作為有機溶劑的丙酮，有著一定的毒性，不符合目前環保趨勢，并且丙酮在一定程度上還會引起蛋白質活性丟失。

發明內容

本發明旨在克服現有技術存在的缺陷，提供一種從啤酒酵母中提取的具有優異抗氧化活性的奧古蛋白，所述奧古蛋白的原料來源豐富，提取工藝高效、安全、環保，應用價值廣泛。

本發明提供了一種從啤酒酵母中提取的奧古蛋白，所述奧古蛋白由包括以下步驟的方法制備而成：

1)將啤酒酵母溶解于磷酸鹽緩沖液中，所述磷酸鹽緩沖液的pH值為6.5～6.7，濃度為0.04～0.06mol/L；在1000～2000bar條件下高壓均質，循環5～10次，離心，取上清液；加入硫酸銨靜置、離心、收集沉淀；

2)將步驟1)所得沉淀溶解于磷酸鹽緩沖液中，所述磷酸鹽緩沖液的pH值為6.5～6.7，濃度為0.02～0.03mol/L，將所得溶液加入平衡好的葡聚糖凝膠柱Sephadex?G-25頂端，用本步驟所述磷酸鹽緩沖液進行洗脫；收集含有蛋白質且不含硫酸銨的洗脫液，濃縮，得濃縮液；

3)在步驟2)所得濃縮液加入平衡好的金屬螯合親和柱頂端，用檸檬酸緩沖液進行洗脫，所述檸檬酸緩沖液的pH值為4.5～6.0，濃度為0.02～0.03mol/L；收集含有蛋白質的洗脫液，濃縮，冷凍干燥，即得奧古蛋白。

本發明步驟1)中所述啤酒酵母作為提取奧古蛋白的原料，具有來源廣泛、生物安全性高的特點；并且啤酒酵母中奧古蛋白含量較高，適于規模化生產奧古蛋白。所述啤酒酵母可以是新鮮的啤酒酵母，也可以對啤酒生產過程中產生的廢啤酒酵母進行再利用，按照常規方法將啤酒廢啤酒酵母進行提純、復壯、擴大培養后，作為原料用于提取奧古蛋白。

本發明所述步驟1)中：所述高壓均質的壓力為1000～2000bar，優選為1500bar，高壓均質應循環進行多次，以保證提取率，循環次數為5～10次，優選為8次；所述磷酸鹽緩沖液為磷酸二氫鉀-磷酸氫二鉀緩沖液，該緩沖液的濃度優選為0.05mol/L，pH值優選為6.6；啤酒酵母與磷酸鹽緩沖液的質量體積比為1：2～8，優選為1：4，此處啤酒酵母的質量單位為g，磷酸鹽緩沖液的體積單位為ml；所述離心的溫度為2～4℃，優選為3℃，離心速度為1000～5000rpm，優選為3000rpm，離心時間為5～15min，優選為10min。

該步驟獲得上清液后，加入硫酸銨后對蛋白進行沉淀；具體采用兩次分級硫酸銨沉淀，步驟為：將硫酸銨以質量體積比0.3～0.5:1溶解于上清液中，靜置30～60min，在2～4℃、8000～9000rpm條件下離心15～30min，分離上清液，收集沉淀；將硫酸銨以質量體積比0.7～0.9:1加入所得上清液中，靜置15～45min，在2～4℃、8000～9000條件下離心15～30min，收集沉淀；將兩次收集所得的沉淀合并；此處硫酸銨的質量單位為g，粗提液的體積單位為ml。