[發明專利]從豚草中分離純化兩種倍半萜內酯化合物的方法及應用

有效

• 申請號: 201410853228.5
• 申請日: 2014-12-31
• 公開（公告）號: CN104447787A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 丁文兵;黃蕊;李有志;劉雙清
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: C07D493/10
• 分類號: C07D493/10;C07D493/04;A01P9/00
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 何為;袁穎華

技術領域

本發明屬于農業防治領域，具體地說，是一種從豚草中分離純化兩種倍半萜內酯化合物psilostachyin和psilostachyin?B的方法和應用。

背景技術

福壽螺(Pomacea?canaliculata?Lamarck)起源于南美洲，在我國主要分布于長江以南地區，主要取食水稻分蘗嫩芽和水生植物，是一種對農業生產危害十分嚴重的入侵水生動物。目前對福壽螺的防治主要以化學藥劑防治為主，如氯硝柳胺和聚乙醛等，但化學藥劑除成本高，對其它非靶標生物毒性較大外，還對生態環境污染嚴重，影響農業的安全生產。豚草(Ambrosia?artemisiifolia?L.)是近年來入侵我國的惡性雜草，能嚴重影響農業生產，并破壞生物的多樣性。因此，利用豚草這種惡性入侵植物來滅殺福壽螺，既能有效地控制福壽螺，又能在一定程度上遏制豚草的蔓延，可謂“以毒攻毒”、“一箭雙雕”。

已有專利CN103004892A報道豚草干粉對福壽螺有毒殺作用，在水體中投加10g/L的豚草干粉末3天后能滅殺95％的福壽螺，顯示了豚草具有較好的殺福壽螺應用前景。但是該專利并未涉及豚草中滅殺福壽螺的活性成分，截至目前，國內外對豚草中滅殺福壽螺的活性成分也尚無研究報道。基于此，本發明進一步對豚草的活性成分進行分離純化，提供了一種從該植物中快速提取純化出毒殺福壽螺活性成分的方法。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是：針對上述現有技術的不足，提供一種操作簡便的從豚草中分離純化兩種倍半萜內酯化合物的方法，同時提供該兩種化合物在防治福壽螺中的應用。

為了解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案是：一種從豚草中分離純化兩種倍半萜內酯化合物的方法，該方法步驟如下：

A、取豚草地上部分，洗凈、風干、粉碎成粒度≤20目的粉末，按1g豚草粉加3-7ml?95％體積百分濃度的乙醇的比例，于豚草粉中加入乙醇在室溫下浸提3次，每次浸提48-96小時，過濾，合并濾液，減壓濃縮回收乙醇后，得到膏狀乙醇浸提物；

B、按1g乙醇浸提物加30-60ml水的比例，將乙醇浸提物加水分散，再依次用等體積的石油醚和乙酸乙酯于常溫分別萃取3次，每次萃取時間為3-5小時，得到石油醚萃取層和乙酸乙酯萃取層，減壓回收石油醚和乙酸乙酯萃取液，得石油醚浸膏和乙酸乙酯浸膏；其中，石油醚和乙酸乙酯皆為分析純；

C、將乙酸乙酯浸膏用甲醇溶解為飽和溶液后經小孔吸附樹脂吸附至飽和，先用水洗脫至無色后，再用90％體積百分濃度的甲醇洗脫至無色，收集洗脫液，濃縮得濃縮物；

上述小孔吸附樹脂只要是能用于去除乙酸乙酯膏色素的皆可，如MCI?GEL?CHP?20P?37-75um或SMB?MCI?GEL?50-70um等。

D、將濃縮物上ODS?C-18反相色譜柱進行層析，用體積比為3:7→7:3的甲醇與水的混合液進行梯度洗脫，收集甲醇與水的體積比為4:6時的洗脫液，經薄層色譜檢測，合并相同主點餾分，得到兩組分，將該兩組分分別上葡聚糖凝膠柱(Sephadex?LH-20)柱層析進行純化，用甲醇進行洗脫，經薄層色譜檢測，合并主點餾分并減壓濃縮，獲得兩個固體狀物，再將所得固體分別用體積比為1：1混合的石油醚和丙酮重結晶，得到單體化合物1和2；

E、采用核磁共振氫譜及核磁共振碳譜技術對上述單體化合物1和2進行結構鑒定及理化性質的比對，確證所得單體化合物1為psilostachyin，單體化合物2為psilostachyin?B。

經驗證，上述二單體化合物psilostachyin和psilostachyin?B對福壽螺具有毒殺作用，因此，本發明同時提供上述二單體化合物在防治福壽螺中的應用。

如此，本發明從豚草中得到兩個殺福壽螺的主要活性成分，使得開發利用豚草中活性成分比利用豚草干粉防治福壽螺更加高效、可控；本方法操作簡便，且使用的填料小孔吸附樹脂、ODS?C-18、葡聚糖凝膠等都可以重復使用，成本低，污染小。并且，豚草屬于植物材料，利用其提取物防治福壽螺是一種以害治害的生態防控手段，不僅能有效地防治福壽螺，而且可以控制豚草的蔓延；為有害入侵植物的資源化利用開辟了新的途徑，對于入侵生態學及生物入侵控制技術的研究都有極大的參考價值。

具體實施方式

以下結合具體實施例對本發明作進一步說明。

實施例1

1.化合物的提取分離