[發明專利]一種基于生物多樣性信息分離反硝化脫硫細菌的方法

在審

• 申請號: 201410850374.2
• 申請日: 2014-12-31
• 公開（公告）號: CN104450592A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 王愛杰;馬曉丹;高靈芳;遠野;黃聰;譚文博;趙友康;陳川
• 申請（專利權）人: 哈爾濱工業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 侯靜

1.一種基于生物多樣性信息分離反硝化脫硫細菌的方法，其特征在于它是按照以下步驟進行的：

一、從穩定運行的進行生物脫硫脫氮的膨脹顆粒污泥床反應器采集污泥樣品；

二、采用的高通量測序技術對污泥樣品進行群落空間結構與豐度分析，獲得生物學多樣性信息；其中，所述的生物學多樣性信息是指：菌群豐度波動和空間生態分布信息；同時將步驟一中采集的污泥按體積比為1:5的比例加入無菌水，同時放入玻璃珠，在轉速為220轉/分鐘的條件下振蕩培養24小時，得各菌屬的懸液；

三、對步驟二各菌屬的菌液稀釋后，涂布于與各菌屬對應的固體培養基上，然后在其上澆蓋與該菌屬對應的固體培養基，制成各菌屬的厭氧夾層培養基，在恒溫培養箱溫度為30℃的條件下進行厭氧培養至培養基夾層中產生氣泡；

四、剝離步驟三中各菌屬的厭氧夾層培養基的覆蓋部分，挑取氣泡內的各菌屬的單菌落，轉入各菌屬對應的液態分離培養基中，進行擴大培養，在恒溫培養箱30℃，培養周期為14天；

五、取步驟四培養后各菌屬的菌液，在各菌屬對應的固體培養基上進行平板劃線培養；然后置于恒溫培養箱中，在30℃條件下進行培養至出現單菌落，挑取各菌屬的單菌落轉入各菌屬對應的液態培養基中培養；

六、重復步驟三至步驟五的操作3次，分離出各菌屬的單一菌落后，即完成從有機廢水生物脫硫脫氮系統中分離反硝化脫硫功能微生物的篩選；其中，步驟二中懸液中包含以下菌屬：索氏菌屬(Thauera?sp.)、固氮弧菌屬(Azoarcus?sp.)、弓形桿菌屬(Arcobacter?sp.)、蒼白桿菌屬(Ochrobactrum?sp.)、硫桿菌屬(Thiobacillus?sp.)、硫螺旋菌屬(Sulfurimonas?sp.)、產堿桿菌屬(Alkaliflexus?sp.)、脫硫弧菌屬(Desulfofutls?sp.)和地桿菌屬(Geoalkalibacter?sp.)。

2.根據權利要求1所述的一種基于生物多樣性信息分離反硝化脫硫細菌的方法，其特征在于步驟一中從穩定運行的進行生物脫硫脫氮的膨脹顆粒污泥床反應器采集污泥樣品，是指從對有機廢水中碳、氮、硫污染物去除率均達到99％的穩定運行的進行生物脫硫脫氮的膨脹顆粒污泥床反應器采集污泥樣品。

3.根據權利要求1所述的一種基于生物多樣性信息分離反硝化脫硫細菌的方法，其特征在于步驟一中采集污泥是從不同高度的穩定運行的進行生物脫硫脫氮的膨脹顆粒污泥床反應器采集得到的。

4.根據權利要求1所述的一種基于生物多樣性信息分離反硝化脫硫細菌的方法，其特征在于步驟二中獲得的生物學多樣性信息是指獲得了有機廢水生物脫硫脫氮系統的生物學多樣性信息。