[發明專利]一種試劑盒及其制備方法有效
| 申請號： | 201410848119.4 | 申請日： | 2014-12-31 |
| 公開（公告）號： | CN104531902A | 公開（公告）日： | 2015-04-22 |
| 發明（設計）人： | 田克恭;李春歌 | 申請（專利權）人： | 洛陽普萊柯萬泰生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京華夏正合知識產權代理事務所(普通合伙) 11017 | 代理人： | 韓登營 |
| 地址： | 471000*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 試劑盒 及其 制備 方法 | ||
1.一種試劑盒，其中，所述試劑盒包括能擴增PEDV?S1蛋白基因中包含5`端啟動子前第28位核苷酸至啟動子后第532位核苷酸的核苷酸序列的上、下游引物，以及Pst?I限制性內切酶。
2.根據權利要求1所述的試劑盒，其中，上游引物為SEQ?ID?NO.2編碼的核苷酸序列，下游引物為SEQ?ID?NO.3編碼的核苷酸序列。
3.根據權利要求1所述的試劑盒，其中，所述試劑盒進一步包含PCR反應體系和限制性酶切反應體系；
其中，所述PCR反應體系包括dNTPs、DNA聚合酶、Mg2+、反轉錄酶、RNA酶抑制劑、穩定劑；以及
所述限制性酶切反應體系包括Pst?I酶切緩沖液、雙蒸水。
4.根據權利要求1所述的試劑盒，其中，所述試劑盒還包含陰性對照和陽性對照；
其中，所述陰性對照為磷酸鹽緩沖液；以及
所述陽性對照包括豬流行性腹瀉病毒經典株的培養物、豬流行性腹瀉病毒變異株的培養物。
5.根據權利要求4所述的試劑盒，其中，所述豬流行性腹瀉病毒經典株的培養物為CV777株、ZJ08株、DR-13株、CPF1074株、PFF513株、KPD-9F株、SM98株、Brl/87株、JMe2株和P-5V株的培養物；以及
所述豬流行性腹瀉病毒變異株的培養物為變異株S1蛋白具有與SEQ?ID?No.1實質上相同的核苷酸序列的PEDV的培養物；優選地，所所述豬流行性腹瀉病毒變異株的培養物包括豬流行性腹瀉病毒HN1301株、AH2012株、BJ-2011-1株、GDYG株。
6.根據權利要求1所述的試劑盒，其中，所述試劑盒還包含病毒基因組提取體系。
7.一種制備權利要求1～6所述試劑盒的方法，其中，所述方法包括：
(1)合成所述能擴增PEDV?S1蛋白基因中包含5`端啟動子前第28位核苷酸至啟動子后第532位核苷酸的核苷酸序列的上、下游引物；
(2)將所述引物與Pst?I限制性內切酶、PCR反應體系和Pst?I限制性酶切反應體系、陰性對照、陽性對照組裝成試劑盒。
8.根據權利要求1～6所述試劑盒的使用方法，其中，所述方法包括：
(1)提取樣品中病毒基因組；
(2)使用引物對所述步驟(1)提取的病毒基因組進行RT-PCR擴增；
(3)對所述步驟(2)擴增的PCR產物進行Pst?I酶切鑒定；以及
(4)根據所述Pst?I酶切結果進行判定。
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