[發明專利]柱狀黃桿菌選擇性培養基及利用其分離純化柱狀黃桿菌的方法

有效

• 申請號: 201410845838.0
• 申請日: 2014-12-31
• 公開（公告）號: CN104651266A
• 公開（公告）日: 2015-05-27
• 發明（設計）人: 周偉東;林蠡;張玉蕾;鄧俊杰;譚銳敏;艾桃山;姬偉;周洋;劉小玲;袁改玲
• 申請（專利權）人: 武漢市水產科學研究所;華中農業大學;深圳市鴻鵠科技發展有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/20
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 喬宇

1.柱狀黃桿菌選擇性培養基，其特征在于：它是在柱狀黃桿菌常規培養基滅菌冷卻后加入托普霉素使其終濃度為2?μg/mL、多粘菌素B使其終濃度為20?U/mL，倒平板而得到的柱狀黃桿菌選擇性固體培養基；

或為在柱狀黃桿菌常規培養基的配方中去除瓊脂，滅菌冷卻后加入托普霉素使其終濃度為2?μg/mL、多粘菌素B使其終濃度為20?U/mL而得到的柱狀黃桿菌選擇性液體培養基。

2.根據權利要求1所述的柱狀黃桿菌選擇性培養基，其特征在于：所述的柱狀黃桿菌常規培養基為常規Shieh固體培養基。

3.根據權利要求1所述的柱狀黃桿菌選擇性培養基，其特征在于：所述的常規Shieh固體培養基為：稱取蛋白胨5?g、酵母提取物0.5?g、Noble瓊脂10?g?、K₂HPO₄?0.1?g、KH₂PO₄?0.05?g、乙酸鈉0.01?g、NaHCO₃?0.05?g、MgSO₄·7H₂O?0.3?g、BaCl₂·H₂O?0.01?g、FeSO₄·7H₂O?0.001?g、CaCl₂·2H₂O?0.0067?g加入到1000?mL蒸餾水中，調pH至7.2，滅菌而得。

4.根據權利要求1所述的柱狀黃桿菌選擇性培養基，其特征在于：所述的滅菌溫度120℃，滅菌時間為20min。

5.根據權利要求3所述的柱狀黃桿菌選擇性培養基，其特征在于：所述的滅菌溫度120℃，滅菌時間為20min。

6.利用權利要求1所述的柱狀黃桿菌選擇性培養基分離純化柱狀黃桿菌的方法，其特征在于：步驟如下：

1）、在魚類病灶上，采用無菌操作，將細菌通過劃平板法接種到柱狀黃桿菌常規固體培養基上進行培養，至培養基上觀察到柱狀黃桿菌的典型黃色菌落；

2）、挑選上述步驟培養得到的單一黃色菌落，劃線接種到柱狀黃桿菌選擇性固體培養基上，進行培養

3）、挑選上述步驟培養得到的單一黃色菌落，再次接種到柱狀黃桿菌選擇性液體培養基上，進行培養；

4）將上述步驟培養得到的黃色菌液按照10倍系列稀釋，均勻涂布到狀黃桿菌選擇性固體培養基上，進行培養；

5）挑選最低稀釋倍數出現細菌的平板上的單一黃色菌落，接種到柱狀黃桿菌選擇性液體培養基上，進行培養，然后經確證為純的柱狀黃桿菌菌種后，進行低溫保存或干燥保存，即得分離純化后的柱狀黃桿菌。

7.根據權利要求6所述的分離純化柱狀黃桿菌的方法，其特征在于：所述的培養為26-28℃培養24-26小時。

8.根據權利要求6所述的分離純化柱狀黃桿菌的方法，其特征在于：所述步驟4）中進行10倍系列稀釋后得到稀釋度為10^-5~10^-8的體系。

9.根據權利要求6所述的分離純化柱狀黃桿菌的方法，其特征在于：在進行一次選擇分離后未能得到純的柱狀黃桿菌后，再重復步驟2）到步驟5），直到獲得純的柱狀黃桿菌菌種。

10.根據權利要求6所述的分離純化柱狀黃桿菌的方法，其特征在于：所述柱狀黃桿菌的確證包括進行形態學實驗，生理生化實驗和細菌16S?rDNA基因測序實驗，基于形態學特征，生理生化特征和16S?rDNA基因序列特征進行確證。