[發(fā)明專利]一種林蛙油抗氧化多肽

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410842061.2
• 申請(qǐng)日: 2014-12-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104593458A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-05-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳光;趙陽(yáng);趙云霞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 唯美度科技（北京）有限公司
• 主分類號(hào): C12P21/06
• 分類號(hào): C12P21/06;C07K1/34
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及蛋白多肽領(lǐng)域，具體涉及了一種林蛙油抗氧化多肽。

背景技術(shù)

林蛙油，俗稱蛤蟆油或雪蛤膏，《本草綱目》記載：哈士蟆，《本草綱目》中稱之“山哈”，別名哈士蟆、雪蛤。現(xiàn)今被命名為中國(guó)林蛙。主要生長(zhǎng)在中國(guó)東北山區(qū)，包括長(zhǎng)白山脈，小興安嶺大部，張廣才嶺腹地，純野生動(dòng)物，亦被稱為哈什螞(哈士蟆)，是東北地區(qū)特有的蛙種，其雌蛙輸卵管的干燥物稱之為“雪蛤油”，具有補(bǔ)虛潤(rùn)肺、強(qiáng)身健體的功效，自古在民間就被譽(yù)為與東北三寶齊名的傳世滋補(bǔ)佳品。千百年來(lái)廣為人們應(yīng)用，其藥理作用亦早已為人所知。林蛙油是雌蛙懷卵成熟期的輸卵管，其含有大量氨基酸、無(wú)機(jī)元素、維生素和多種復(fù)合多肽等生物活性因子，特別富含三種性激素，即雌二醇、睪酮、孕酮，具有在醫(yī)學(xué)上有“軟黃金”之稱，具有顯著的滋陰強(qiáng)腎激發(fā)免疫功能和調(diào)節(jié)機(jī)理作用，廣泛用于食品、保健品和化妝品等領(lǐng)域。

目前，以林蛙油為原料加工而成的護(hù)膚產(chǎn)品，由于蛋白的分子量過(guò)大而不易被人體吸收。采用常規(guī)的一步酶解法進(jìn)行酶解后，得到的多肽分子量不均一，且小分子量的多肽含量少，依然無(wú)法實(shí)現(xiàn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的高效利用。因此，亟需提供一種能夠被人體吸收的、抗氧化效果好的林蛙油多肽。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的為克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種以林蛙油為原料提取而成的抗氧化多肽，該所述多肽的分子量小，且擁有優(yōu)異抗氧化活性，具有廣泛的應(yīng)用前景。

本發(fā)明提供了一種林蛙油抗氧化多肽，所述抗氧化多肽以林蛙油為原料，由包括以下步驟的方法制備而成：

1)取林蛙油，去除筋膜，加入2～10倍于林蛙油體積的水，置于2～4℃泡發(fā)8～12h，得林蛙油溶液；

2)調(diào)節(jié)步驟1)所得林蛙油溶液的pH值為1.6～1.8，加入0.1～0.3g/ml胃蛋白酶，在35～40℃下充分酶解，得胃蛋白酶解液；

3)調(diào)節(jié)將步驟2)所得胃蛋白酶解液的pH值為6.0～7.0，加入0.2～0.4g/ml中性蛋白酶，在45～55℃下充分酶解，得中性蛋白酶解液；

4)調(diào)節(jié)步驟3)所得中性蛋白酶酶解液的pH值為7.0～8.0，加入0.2～0.4g/ml菠蘿蛋白酶，在55～60℃下充分酶解，得菠蘿酶解液；

5)將步驟4)所得菠蘿酶解液加熱至70～75℃，靜置10～15min，使酶滅活，得酶解液；

6)取步驟5)所得酶解液，使用0.3～0.4μm的濾膜過(guò)濾，收集濾液，再使用截留分子量為4～5kD的超濾膜過(guò)濾，收集濾液，加入活性炭室溫低速攪拌1～3h后，過(guò)濾除去活性炭，真空濃縮，噴霧干燥，即得林蛙油抗氧化多肽。

本發(fā)明使用的林蛙油可為市售的林蛙油，優(yōu)選為新鮮的林蛙油。為了使林硅油中的蛋白充分分解成小分子多肽，本發(fā)明采用胃蛋白酶-中性蛋白酶-菠蘿蛋白酶的多步酶解，具體而言：

本發(fā)明步驟2)中，所述胃蛋白酶的比活為3000～5000U/g，加入量?jī)?yōu)選為0.2g/ml，酶解溫度優(yōu)選為38℃；酶解應(yīng)充分，但若時(shí)間過(guò)長(zhǎng)則會(huì)對(duì)多肽活性產(chǎn)生影響，酶解時(shí)間優(yōu)選為4～5h，進(jìn)一步優(yōu)選為4.5h；

本發(fā)明步驟3)中，所述中性蛋白酶的比活為40000～70000U/g，加入量?jī)?yōu)選為0.3g/ml，酶解溫度優(yōu)選為50℃；酶解應(yīng)充分，但若時(shí)間過(guò)長(zhǎng)則會(huì)對(duì)多肽活性產(chǎn)生影響，酶解時(shí)間優(yōu)選為3～4h，進(jìn)一步優(yōu)選為3.5h；

本發(fā)明步驟4)中，所述菠蘿蛋白酶的比活為600000～900000U/g，加入量?jī)?yōu)選為0.3g/ml，酶解溫度優(yōu)選為58℃；酶解應(yīng)充分，但若時(shí)間過(guò)長(zhǎng)則會(huì)對(duì)多肽活性產(chǎn)生影響，酶解時(shí)間優(yōu)選為2～3h，進(jìn)一步優(yōu)選為2.5h。

作為優(yōu)選方案，本發(fā)明所述林蛙油抗氧化多肽由包括以下步驟的方法制備而成：

1)取林蛙油，去除筋膜，加入2～10倍于林蛙油體積的水，置于2～4℃泡發(fā)8～12h，得林蛙油溶液；

2)調(diào)節(jié)步驟1)所得林蛙油溶液的pH值為1.6～1.8，加入酶的比活為3000～5000U/g的0.1～0.3g/ml胃蛋白酶，在35～40℃下酶解4～5h，得胃蛋白酶解液；

3)調(diào)節(jié)將步驟2)所得胃蛋白酶解液的pH值為6.0～7.0，加入酶的比活為40000～70000U/g的0.2～0.4g/ml中性蛋白酶，在45～55℃下酶解3～4h，得中性蛋白酶解液；

4)調(diào)節(jié)步驟3)所得中性蛋白酶酶解液的pH值為7.0～8.0，加入酶的比活為600000～900000U/g的0.2～0.4g/ml菠蘿蛋白酶，在55～60℃下酶解2～3h，得菠蘿酶解液；