[發明專利]一種嗜熱鏈球菌的特異性分子標記DNA序列及其用途

在審

• 申請號: 201410838715.4
• 申請日: 2015-08-03
• 公開（公告）號: CN104498491A
• 公開（公告）日: 2015-07-29
• 發明（設計）人: 張紅發;任婧;郭本恒;劉振民
• 申請（專利權）人: 光明乳業股份有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68;C12Q1/14
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 朱水平;沈利

1.一種嗜熱鏈球菌(Streptococcus?thermophilus)的特異性分子標記DNA，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.6所示。

2.核苷酸序列組成如SEQ?ID?NO.6所示的嗜熱鏈球菌(Streptococcus?thermophilus)的特異性分子標記DNA在檢測嗜熱鏈球菌中的用途。

3.一種嗜熱鏈球菌的檢測方法，其特征在于，其包括如下步驟：

(1)提取待測樣本的基因組DNA；

(2)以步驟(1)所得的基因組DNA為模板，以SEQ?ID?NO.1所示的半隨機引物為擴增引物進行單引物PCR擴增；

(3)對步驟(2)所得擴增產物進行克隆測序，并將測序結果與SEQ?ID?NO.6所示的核苷酸序列進行比對，若同源度大于99％，則表明待測樣本中含有嗜熱鏈球菌。

4.如權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述的提取待測樣本的基因組DNA的方法為液氮凍融-CTAB法或溶菌酶法。

5.如權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述的單引物PCR擴增的反應體系包括如下組分：0.5～2.0μmol/L半隨機引物，0.2～1.0mmol/L?dNTP，1.0～2.5mmol/L的Mg²⁺，0.02～0.10U/μLTaq?DNA聚合酶，以及0.5～2.0ng/μL基因組DNA模板。

6.如權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述的單引物PCR擴增的反應程序包括：①93-96℃，4-6min；②93-96℃，20-40s；③45-58℃，20-40s；④70-72℃，30-120s；⑤70～72℃，5～10min；其中，步驟②至④的循環數為25-40。

7.如權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述的單引物PCR擴增的反應體系包括如下組分：1.0μmol/L半隨機引物，0.5mmol/L?dNTP，1.5mmol/L的Mg²⁺，0.05U/μLTaq?DNA聚合酶，以及1.0ng/μL基因組DNA模板。

8.如權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述的單引物PCR擴增的反應程序包括：①95℃，5min；②95℃，30s；③50℃，30s；④72℃，2min；⑤72℃，5min；其中，步驟②至④的循環數為35。

9.如權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述的對步驟(2)所得擴增產物進行克隆測序按下述方式進行：將步驟(2)所得擴增產物進行電泳，若在1800bp位置存在擴增條帶，則將該條帶進行克隆測序。

10.如權利要求9所述的檢測方法，其特征在于，所述的電泳為瓊脂糖凝膠電泳。