[發明專利]一種多糖和蛋白肽的聯合制備方法

有效

• 申請號: 201410837532.0
• 申請日: 2014-12-30
• 公開（公告）號: CN104513843B
• 公開（公告）日: 2018-01-19
• 發明（設計）人: 熊何健;馬英;劉智禹;何傳波;魏好程;吳國宏;王嬌
• 申請（專利權）人: 集美大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C08B37/00
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙)11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發明屬于多糖、蛋白的分離提取技術領域，具體涉及一種多糖和蛋白肽的聯合制備方法。

背景技術

福建是鮑養殖大省，鮑年產量近10萬噸，占國內總產量80％以上，隨著市場需求的快速增長，干鮑、凍鮑加工發展迅速，但在加工過程中會產生約占鮑重1/4的內臟等副產物，目前國內外對這些加工副產物的處理主要用來生產飼料等低附加值產品，大部分鮑魚內臟沒有得到充分的利用，不僅浪費資源，也會給環境造成污染。鮑內臟中多糖、蛋白質分占其干物質約20％、50％，是極好的加工生物多糖和小分子蛋白活性肽的資源。鮑內臟多糖、蛋白肽與人體細胞有良好的生物兼容性，無細胞毒性且可被生物體分解，具有增強免疫、抗疲勞、抗氧化及抗腫瘤等生物學活性，在保健食品、護膚日用品、生物制藥等領域有廣泛的應用前景。

目前，利用鮑內臟制備多糖、蛋白肽的工藝主要是針對多糖或蛋白肽進行單獨提取、制備，缺乏聯合制備工藝，原料利用率低。同時，由于鮑內臟中多糖與蛋白質主要以糖蛋白的結合形式存在，無論是采用熱水/堿浸提、單一的酶解或膜分離技術制備獲得的鮑多糖，均含有較多的蛋白質成分，導致鮑多糖純度低，而后期無論采用Sevag法或三氯乙酸法脫蛋白，還是采用過氧化氫或活性炭脫色，都會導致產物的得率明顯降低。

發明內容

本發明針對現有技術存在的缺陷，使用分步酶解和膜分離技術組合工藝，旨在提供一種鮑內臟多糖和蛋白肽的聯合制備方法。

本發明具體通過以下技術方案實現：

一種多糖和蛋白肽的聯合制備方法，包括以下步驟：

1)原料預處理：將鮑內臟濕物料絞碎，加水混合在100～105℃條件下蒸煮10～20min，降溫至50℃；

2)第一次酶解：添加堿性蛋白酶，酶解完成后，料液煮沸10～15min，冷卻至40℃以下，離心分離得沉淀和酶解液；

3)第一次膜分離：將酶解液進行膜分離，得到透過液和截留液；

4)第二次酶解：截留液加水稀釋，加入步驟(2)中沉淀物，添加風味蛋白酶進行二次酶解，酶解完成后加入料液重量1～2％的活性炭粉末，煮沸10～15min，冷卻至40℃以下，離心去除沉淀，得酶解液；

5)第二次膜分離：所得酶解液除去懸浮微粒及雜質，濾液進行膜分離，得到透過液和截留液；

6)干燥制備：步驟(5)所得截留液通過冷凍干燥、噴霧干燥或醇沉、真空干燥處理得到鮑內臟多糖；步驟(3)和(5)所得透過液合并，通過反滲透或真空濃縮處理后，冷凍干燥或噴霧干燥得鮑內臟蛋白肽。

進一步，

步驟(1)中所述的加水量為鮑內臟濕物料重量的5～8倍。

步驟(2)中酶的添加量為200～600U/g鮑內臟原料，酶解反應時間為8～16h。

步驟(3)中酶解液用截留分子量5000～10000Da的膜進行膜分離，所述的截留液的體積為酶解液的1/6～1/4。

步驟(4)中截留液加1～2倍體積的水稀釋，所述的風味蛋白酶的添加量為50～200U/g鮑內臟原料，酶解時間為6～10h。

步驟(5)中酶解液用過濾精度為1.0～5.0微米的微孔過濾機過濾除去懸浮微粒及雜質，濾液用截留分子量5000～10000Da的膜進行膜分離，得到截留液的體積為酶解液的1/6～1/4。

本發明的有益效果為：

1)采用不同的蛋白酶對鮑內臟進行分步酶解，達到了充分分解的目的；

2)采用多次酶解和膜分離聯合制備工藝有利于獲得低蛋白含量的高純度鮑內臟多糖；

3)選用堿性蛋白酶為第一次酶解用酶，酶解的堿性pH環境可以促進多糖類物質從原料中釋放、溶出；選用同時含有端肽酶和內切酶活性的風味蛋白酶為第二次酶解用酶，有利于將第一次酶解獲得的粗多糖中的蛋白質進一步水解；

4)鮑內臟含有大量的色素類物質，鮑內臟多糖、蛋白肽的制備過程中要進行脫色處理。本發明第一次膜分離時，色素隨多糖類物質被截留，蛋白肽透過液無需進行脫色處理，截留物進行二次酶解后，滅酶前加入活性碳，同時完成滅酶和脫色處理，活性碳還能吸附物料中的懸浮顆粒，有利于后續的膜分離操作。

附圖說明

圖1是鮑內臟多糖G100凝膠柱色譜圖；

圖2是多肽分子量測定標樣凝膠色譜HPLC圖；

圖3是鮑內臟蛋白肽分子量分布凝膠色譜HPLC圖。

具體實施方式