[發明專利]一種肝素鈉中多硫酸軟骨素的檢測方法

無效

• 申請號: 201410837520.8
• 申請日: 2014-12-29
• 公開（公告）號: CN104483415A
• 公開（公告）日: 2015-04-01
• 發明（設計）人: 劉冠男;王洪見;夏襯來
• 申請（專利權）人: 青島九龍生物醫藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及肝素鈉中多硫酸軟骨素的檢測方法。

背景技術

我國是肝素鈉產量最大的國家，國際市場的肝素鈉產品原料70％以上來自中國。隨著需求的增加，肝素鈉的價格一路攀升。2008年2約，美國因注射肝素鈉出現4例死亡，多例不良反應的醫療事故，成為震驚世界的“肝素鈉事件”。經有關專家分析，上述事故可能是因為與肝素鈉中含有的多硫酸軟骨素有關。商務部已通過中國醫藥保健品進出口商會和有關省、市商務主管部門向有關肝素鈉出口企業發出緊急通知，要求在進料檢驗、生產管理和出廠檢驗環節嚴格把關，完善出口產品質量管理檔案和售后質量跟蹤體系，確保出口產品的質量安全。因此，對肝素鈉中多硫酸軟骨素進行檢測成為肝素鈉質量控制的重要一環。

發明內容

本發明提供了肝素鈉中多硫酸軟骨素的檢測方法，對極低含量的多硫酸軟骨素也能有效檢測，靈敏度高達0.05％。本法準確度高，重現性好。

本發明采用如下技術方案予以實現：

一種肝素鈉中多硫酸軟骨素的檢測方法，包括如下步驟：

1.稱取多硫酸軟骨素標準品適量加水溶解，制成OSCS標準溶液。

2.稱取肝素鈉標準品適量加水溶解，制成肝素鈉標準溶液。

3.取OSCS標準溶液適量加入到肝素鈉標準溶液中，制成系統適應性溶液。

4.稱取肝素鈉精品原料藥適量加水溶解，制成待測樣品溶液。

5.稱取磷酸氫二鈉，加適量水溶解，制成流動相A溶液，超聲脫氣備用。

6.稱取高氯酸鈉適量加水溶解，制成流動相B溶液，超聲脫氣備用。

7.使用安捷倫高效液相色譜色譜儀進行分析。

附圖說明

圖1為系統適應性溶液譜圖，其中第一個峰為肝素峰，第二個峰為多硫酸軟骨素峰。

圖2為待測樣品溶液譜圖，圖中只有一個肝素峰，未檢出多硫酸軟骨素峰，說明此肝素樣品中無多硫酸軟骨素。

具體實施方式

1.稱取多硫酸軟骨素標準品2.1mg，加水2.100mL溶解制成1mg/mL的OSCS標準溶液。

2.稱取肝素鈉標準品24.6mg，加水0.615mL溶解制成40mg/mL的肝素鈉標準溶液。

3.取OSCS標準溶液12.3μL加入到肝素鈉標準溶液中，制成多硫酸軟骨素相對于肝素鈉濃度為0.05％(w/w)的系統適應性溶液。

4.稱取待測肝素鈉樣品95.6mg，加水2.390mL溶解制成40mg/mL的待測樣品溶液。

5.稱取1.0003g磷酸氫二鈉，加水1000mL溶解,用20％磷酸溶液調節pH值為3.5，制成0.1％的流動相A，脫氣備用。

6.稱取280.0012g高氯酸鈉，加水溶解，定容至1000mL,用20％磷酸溶液調節pH值為3.5，制成2mol/L的流動相B，脫氣備用。

7.使用高效液相色譜儀按如下條件進行分析：

流速：0.3ml/min；

檢測器：紫外檢測器254nm；

進樣體積：20μl；

色譜柱：2mmx250mm，IonPac?AS11；

柱溫箱溫度：35℃；

流動相梯度：

時間流動相A(％)流動相B(％)0.0075255.00307010.00307015.00752524.007525