[發明專利]一種鑒定豬耳面積大小的方法及其專用試劑盒

有效

• 申請號: 201410834465.7
• 申請日: 2014-12-26
• 公開（公告）號: CN104561293A
• 公開（公告）日: 2015-04-29
• 發明（設計）人: 王立賢;王紅衛;張龍超;梁晶
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所;北京黑六牧業科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;陳曉慶

技術領域

本發明涉及一種鑒定豬耳面積大小的方法及其專用試劑盒，屬于生物技術領域。

背景技術

我國養豬的歷史可謂悠久，鑒于大耳文化的熏陶，我國很多地方豬品種多數都具有一雙大耳，尤其以太湖豬為甚。受不同地域耳文化的影響，不同地域對豬耳大小的選擇方向性存在巨大差異，于是就出現了不同豬種豬耳大小和形態的豐富多樣性。甚至對于一些地方豬品種如大耳的二花臉豬、東北民豬和小耳的滇南小耳豬、廣東小耳花豬等，耳大小已經成為了其品種特異性標志之一。

豬耳面積性狀QTL定位及主效基因研究已經在國內外研究中開展。英國羅斯林研究所研究人員利用大白豬×梅山豬F2設計資源群體，耳面積性狀顯著QTL分別被定位于5號染色體上51cM和7號染色體上70cM處(Wei?WH,de?Koning?DJ,Penman?JC,Finlayson?HA,Archibald?AL,Haley?CS:QTL?modulating?ear?size?and?erectness?in?pigs.Anim?Genet?2007,38:222-226.)。另外，江西農業大學研究人員利用白色杜洛克×二花臉F2設計資源群體開展了耳面積性狀QTL定位研究，分別將QTL定位于5號染色體上70cM和7號染色體上58cM處(Ma?J,Qi?W,Ren?D,Duan?Y,Qiao?R,Guo?Y,Yang?Z,Li?L,Milan?D,Ren?J,Huang?L.A?genome?scan?for?quantitative?trait?loci?affecting?three?ear?traits?in?a?White?Duroc×Chinese?Erhualian?resource?population.Anim?Genet?2009,40:463-467.)，且這兩個QTL分別可以解釋45％和17％的表型變異。其中，在5號染色體上耳面積性狀QTL區間內存在一個LEMD3(LEM?domain?containing?3)基因，該基因編碼的LEMD3蛋白是核內在膜蛋白，可通過蛋白羧基末端的結構域與Smad蛋白家族中Smad2及Smad3結合，抑制抗轉化生長因子-β(TGF-β)以及骨形態發生蛋白(BMP)信號通路的活性，從而影響骨的正常發育。LEMD3基因也是導致人類三種骨密度異常疾病：脆弱性骨硬化癥(osteopoikilosis)、科斯綜合癥(Buschke-Ollendorff?syndrome)和局限性吝狀過骨癥(melorheostosis)的因果基因(Bourgeois?B,Gilquin?B,Tellier-Lebègue?C,C,Wu?W,et?al.(2013)Inhibition?of?TGF-β?signaling?at?the?nuclear?envelope:characterization?of?interactions?between?MAN1,Smad2and?Smad3,and?PPM1A.Sci?Signal?6(280):ra49.；HeIlemans?J,Preobrazhenska?O,Willaert?A,et?al.Loss-of-function?mutations?in?LEMD3result?in?osteopoikilosis,Buschke-Ollendorff?syndrome?and?melorheostosis.Nat?Genet,2004,36(11):1213-1218.；Ben-Asher?E,Zelzer?E,Lancet?D.LEMD3:the?gene?responsible?for?bone?density?disorders(osteopoikilosis).Isr?Med?Assoc?J,2005Apr；7(4):273-4.)。綜合上述研究，LEMD3基因可作為耳面積性狀主效候選基因，具有很高研究價值。

單堿基延伸(SBE)是SNP分型的常用技術，也被成功應用于SNP芯片技術中，該技術是以普通多重PCR產物為模版，針對SNP位點進行單堿基延伸。每個SNP位點設計一條SBE引物，延伸堿基為SNP位點，在整個反應體系中需加入單堿基延伸酶和兩種不同類型熒光所標記的ddNTP，延伸一個堿基即可終止延伸反應，以達到單堿基延伸的目的。SNP位點信號通過2次PCR得到了有效放大，檢測的靈敏度模板DNA可達到1ng，目前已成為了一種對SNP序列特異性要求低、靈敏度高、操作簡單的SNP分型芯片技術。

發明內容

本發明的目的是提供一種鑒定豬耳面積大小的方法及其專用試劑盒。