[發明專利]一種新型的脂肪酶

在審

• 申請號: 201410829530.7
• 申請日: 2014-12-23
• 公開（公告）號: CN105779412A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 曾阿娜;于鈺;馮奇;叢芳;許駿
• 申請（專利權）人: 豐益（上海）生物技術研發中心有限公司
• 主分類號: C12N9/20
• 分類號: C12N9/20;C12N15/55;C12N15/70;A23C9/12
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

本申請提供了一種具有脂肪酶活性的多肽，其包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或在上述序列中包含至少一個氨基酸取代、缺失或添加的序列。本申請還提供了編碼所述多肽的多核苷酸、含有該多核苷酸的表達載體和宿主細胞，以及生產上述多肽的方法。此外，還涉及上述具有脂肪酶活性的多肽的用途。

發明領域

本申請屬于基因工程或酶工程領域，具體地，涉及具有脂肪酶活性的多肽、其編碼核酸，以及包含所述編碼核酸的表達載體和宿主細胞。本申請還涉及上述多肽的制備方法及其用途。

發明背景

脂肪酶是一類具有多種催化能力的酶，可以催化三酰甘油酯水解為甘油和游離脂肪酸，還可以催化其他酯類的水解和轉酯化以及酯類的合成反應。此外，脂肪酶還表現出對底物的對映選擇性。以上特性賦予了脂肪酶在食品油脂加工、洗滌劑、生物柴油、酯鍵化合物的合成和手性藥物合成等工業的廣泛應用(Abhishek Kumar Singh,MausumiMukhopadhyay.Overview of Fungal Lipase:A Review.2012,166(2):486-520)。

例如，在油脂加工方面，由于脂肪酶的引入，油脂水解可在常溫常壓下進行，因此不會使高度不飽和脂肪酸和生育酚等生物物質變性。在醫療方面，脂肪酶作為診斷工具，可預測疾病，如血清中脂肪酶可用于檢測急性胰腺炎和胰腺損傷。脂肪酶在藥物生產、減輕體重等方面也有應用。在生物柴油合成方面，酶法具有提取純化工藝簡單、設備投資少、耗能低、污染小等優點，日益引起人們的普遍關注，其中織物膜固定化的Novozym 435和假絲酵母(Candida sp.)99-125是生產生物柴油的常用酶。在洗滌工業方面，1988年，諾維信公司首先將含脂肪酶且能有效除去油污的洗滌劑推向市場，應用遺傳工程開發出洗滌劑用脂肪酶更是現代生物技術大規模工業化最成功的應用之一。在紙漿和造紙工業，脂肪酶被用來除去紙漿中的“洽脂”，日本Nippon紙業研制了一種“洽脂”控制方法，即用Candida rugasa脂肪酶水解甘三酯，水解度達90％。

脂肪酶催化乳脂肪的水解，產生游離脂肪酸。脂肪酸可以包括短鏈(C₄-C₆脂肪酸，即丁酸、己酸)和中到長鏈(C₁₂-C₁₈)脂肪酸。隨后游離脂肪酸可參與化學反應，例如香味化合物，如乙酸乙酯、β-酮酸、甲基酮、酯和內酯的形成。使用的脂肪酶可以影響乳酪中釋放的游離脂肪酸的類型，例如，辛辣的、強烈的香味主要產生于釋放短鏈脂肪酸(C₄-C₆)的脂肪酶，而中長鏈脂肪酸則會產生肥皂樣的口味。許多研究致力于將脂肪酶改造為短鏈偏好型，以應用于乳酪制造。

發明概述

第一方面，本申請提供了具有脂肪酶活性的多肽，其包含選自以下的序列或由選自以下的序列組成：

(a)如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，以及

(b)由(a)所述的序列經過取代、缺失或添加至少一個氨基酸后得到的序列，其中由(b)獲得的多肽變體仍保持脂肪酶活性。

在任選的實施方案中，上述多肽與異源多肽融合。

在一實施方案中，本申請的多肽包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。在優選的實施方案中，上述多肽由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列組成。

第二方面，提供了編碼第一方面的多肽的多核苷酸，其包含選自以下的序列或由選自以下的序列組成：

(a)核苷酸序列，其編碼SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或在上述序列中包含至少一個氨基酸取代、缺失或添加的序列；以及

(b)在嚴格條件下與a)中的核苷酸序列雜交的核苷酸序列。

在一實施方案中，本發明的多核苷酸包含SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。在優選的實施方案中，上述多核苷酸由SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列組成。