[發(fā)明專利]一種甾體乙基羥化物的分離純化方法

有效

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• 申請日: 2014-12-29
• 公開（公告）號: CN104496872B
• 公開（公告）日: 2018-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 金漢斌;孫新宇;羅敏;曹青青;潘立;魏建
• 申請（專利權(quán)）人: 華潤紫竹藥業(yè)有限公司
• 主分類號: C07C401/00
• 分類號: C07C401/00;C07C49/753;C07C45/78
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分離純化技術(shù)，具體涉及甾體乙基羥化物的分離純化方法。

背景技術(shù)

甾體類中間體往往可用于生產(chǎn)臨床上各種藥物。13β-乙基-3-甲氧基-8，14-開鏈-1，3，5(10)，9(11)-雌四烯-17β-醇-14-酮(后簡稱為乙基羥化物)就是一種重要的甾體中間體，口服避孕藥毓婷的活性成分左炔諾孕酮多由其合成而來，其結(jié)構(gòu)式如下：

在甾體激素中，人們把天然雌激素的構(gòu)型定為D-構(gòu)型，凡與天然雌激素構(gòu)型相同的激素都屬于D-構(gòu)型。經(jīng)臨床證明只有天然構(gòu)型的甾體激素才是具有生物活性的。但是用化學(xué)方法合成甾體化合物時往往只能得到消旋性的混合物，即包括左右旋光的兩種異構(gòu)體，其中之一是不需要的，必須經(jīng)過分離，這在工業(yè)上是不經(jīng)濟的。

已經(jīng)證明微生物對甾體轉(zhuǎn)化具有立體專一性，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物為單一構(gòu)型的具光學(xué)活性的化合物。正因為微生物轉(zhuǎn)化的特有優(yōu)勢，目前微生物轉(zhuǎn)化在甾體藥物的合成中具有重要地位，幾種重要的甾體微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)如羥化、脫氫和邊鏈降解已經(jīng)成為工業(yè)上生產(chǎn)甾體激素及其類似物的重要方法。左炔諾孕酮中間體乙基羥化物工業(yè)上也是由微生物轉(zhuǎn)化而成。但微生物轉(zhuǎn)化也存在組分復(fù)雜，產(chǎn)物分離提取困難的問題。

法幼華等(微生物學(xué)報.18(3)：232-238，1978)報道了啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae AS2.346)轉(zhuǎn)化生成乙基羥化物，其提取純化工藝為乙酸乙酯或乙醇提取菌體4-5次，提取液減壓濃縮，濃縮液冷卻后固化，用環(huán)己烷或石油醚∶乙酸乙酯(50∶1)洗滌，過濾烘干后得到產(chǎn)物結(jié)晶，收率低于90％，且必要時須進一步精制，精制后純度小于95％。目前工業(yè)上生產(chǎn)方法都與此類似，普遍存在著提取液濃縮后結(jié)成大塊，夾雜雜質(zhì)較多且操作不便，同時洗滌工藝往往由于洗滌有機溶劑不能均勻淋洗造成產(chǎn)物純度較低，批間波動較大，部分批次需反復(fù)精制的問題。

發(fā)明內(nèi)容

由于現(xiàn)有技術(shù)中采用有機溶媒提取后直接析晶，得到的收率低，且純度低，需要進一步精制，且存在提取液濃縮后結(jié)塊的問題，本發(fā)明開創(chuàng)性地采用有機溶媒提取后進行水析再析晶的方法，解決了現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題。

本發(fā)明提供一種分離純化效率高，收率高，生產(chǎn)操作方便，對設(shè)備、人員要求較低，適于大規(guī)模生產(chǎn)的甾體乙基羥化物的分離純化方法。

實現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案為：

一種甾體乙基羥化物的分離純化方法，包括如下步驟：

1)發(fā)酵液提取濃縮

經(jīng)過生物轉(zhuǎn)化的發(fā)酵液經(jīng)離心獲得菌體，采用含有C1-C6的醇或酮的有機溶媒提取獲得提取液，提取液經(jīng)過減壓濃縮得到濃縮液，有機溶媒濃縮后體積與發(fā)酵液中所含乙基羥化物的重量比為0.6∶1-10∶1；

2)濃縮液水析

在加熱攪拌狀態(tài)下，往濃縮液中加入水，加水后即可得到大量顆粒狀水析粗品；

3)粗品全溶析晶

向粗品中加入與粗品的體積重量比為0.4∶1-10∶1的C1-C6的醇、酯或酮的有機溶媒，加熱攪拌至粗品完全溶解，向溶液中加脂肪或環(huán)狀脂肪碳氫化合物溶劑，同時攪拌冰浴析晶保溫0.5小時，過濾后烘干即可得到精制品。

上述步驟1)中的C1-C6的醇或酮的有機溶媒中的醇為甲醇、乙醇或丙醇，酮為丙酮或丁酮。

上述步驟3)中的C1-C6的醇、酯或酮的有機溶媒中的醇為甲醇、乙醇或丙醇，酯為乙酸乙酯或乙酸丁酯，酮為丙酮或丁酮。

上述步驟3)中的脂肪或環(huán)狀脂肪碳氫化合物溶劑為正己烷、環(huán)己烷或甲基環(huán)己烷。

上述步驟1)中的有機溶媒濃縮后體積與發(fā)酵液中所含乙基羥化物的重量比為0.6-5∶1。

上述步驟3)中的有機溶媒加入體積與粗品的體積重量比為0.4-5∶1。

所述體積重量比，體積單位為ml，重量單位為g。

本發(fā)明的有益效果為：

1、采用本發(fā)明的方法水析粗品收率高(≥98％)，雜質(zhì)去除好，純度高(98％以上)，質(zhì)量穩(wěn)定。而有機溶媒提取后直接析晶則由于有機溶媒的存在粗品收率不高(低于90％)，純度差(低于95％)，有機溶媒濃縮程度高保留體積較少時則有粗品多成大塊狀包裹雜質(zhì)，顏色較深，存在末熔不清的問題。

2、本發(fā)明的方法精制工藝為粗品全溶后析晶，精品粒徑均一，質(zhì)量穩(wěn)定，避免了有機溶媒洗滌不均的問題，同時也避免了塊狀粗品中間部分難以精制的問題。

3、設(shè)備要求簡單：本發(fā)明的方法所用到的設(shè)備都是比較簡單和常用的設(shè)備，易于工業(yè)化生產(chǎn)。