[發明專利]一種磁珠法提取細菌中核酸的試劑盒及提取方法

無效

• 申請號: 201410828555.5
• 申請日: 2014-12-26
• 公開（公告）號: CN104450684A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 王煒;孟慶海;李智洋;何農躍;曲文靜
• 申請（專利權）人: 南京中科神光科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 張曉霞

1.一種磁珠法提取細菌中核酸的試劑盒，所述試劑盒中的試劑含有以下組分：細菌裂解液、磁珠結合液、磁珠洗滌液和核酸洗脫液，其特征在于：

所述細菌裂解液含有以下組分：十二烷基硫酸鈉、乙二胺四乙酸、三羥甲基氨基甲烷和氯化鈉；

所述磁珠結合液含有以下組分：聚乙二醇-8000和氯化鈉；

所述磁珠洗滌液含有以下組分：乙醇；

所述核酸洗脫液含有以下組分：三羥甲基氨基甲烷和乙二胺四乙酸。

2.根據權利要求1所述的磁珠法提取細菌中核酸的試劑盒，其特征在于：在所述磁珠結合液中，聚乙二醇-8000的濃度為20-30mmol/L，氯化鈉的濃度為3mol/L。

3.根據權利要求1所述的磁珠法提取細菌中核酸的試劑盒，其特征在于：在所述磁珠洗滌液中，乙醇的體積比濃度為70％-90％。

4.根據權利要求1所述的磁珠法提取細菌中核酸的試劑盒，其特征在于：在所述核酸洗脫液中，三羥甲基氨基甲烷的濃度為5-15mmol/L，乙二胺四乙酸的濃度為1.30-1.50mmol/L。

5.根據權利要求4所述的磁珠法提取細菌中核酸的試劑盒，其特征在于：所述三羥甲基氨基甲烷的濃度為10mmol/L，所述乙二胺四乙酸的濃度為1.35mmol/L。

6.根據權利要求1至5任一項所述的磁珠法提取細菌中核酸的試劑盒，其特征在于：所述十二烷基硫酸鈉的濃度為40-60mmol/L，所述乙二胺四乙酸的濃度為20-40mmol/L，所述三羥甲基氨基甲烷的濃度為90-115mmol/L，所述氯化鈉的濃度為480-520mmol/L，余量為無菌水；所述細菌裂解液通過加入氫氧化鈉調節pH值至7.5-8.5。

7.一種磁珠法提取細菌中核酸的提取方法，其特征在于包括以下步驟：

步驟1：將細菌及培養液混合物離心分離，去上清除去細胞培養液，留下細菌菌體；離心分離的轉速為13000r/min，離心分離的時間為2min；

步驟2：向菌體中加入細菌裂解液，混勻；

步驟3：加入磁珠及磁珠結合液，磁珠與核酸結合后，磁鐵吸附磁珠去上清；

步驟4：加入磁珠洗滌液，使用磁鐵吸附磁珠，去上清；

步驟5：加入核酸洗脫液，使用磁鐵吸附磁珠，轉移洗脫液，得到細菌的核酸溶液。

8.根據權利要求7所述的磁珠法提取細菌中核酸的提取方法，其特征在于：步驟2中加入的細菌裂解液的體積與細菌培養液的體積比為1:1-1:5，步驟3中加入的磁珠與磁珠結合液與細菌裂解液的體積比為1:10-1:20，步驟4中磁珠洗滌液與細菌裂解液的體積比為1:0.1-1:0.5，步驟5中核酸洗脫液與細菌裂解液的體積比為1：10-1:20。

9.一種磁珠法提取細菌中核酸的提取方法，其特征在于包括以下步驟：

步驟1：將細菌及培養液混合物離心分離，去上清除去細胞培養液，留下細菌菌體；離心分離的轉速為13000r/min，離心分離的時間為2min；

步驟2：向菌體中加入細菌裂解液，混勻后，轉移至96孔反應板的1排和7排；在2排和8排加入磁珠及磁珠結合液；在3排、4排、5排和9排、10排、11排加入磁珠洗滌液；在6排和12排加入核酸洗脫液；

步驟3：將注入試劑的96孔反應板放入核酸提取儀，自動運行結束后得到細菌核酸洗脫液。

10.根據權利要求9所述的磁珠法提取細菌中核酸的提取方法，其特征在于：步驟2中注入96孔反應板的細菌裂解液的體積為200-300μL，與200-400μL無水乙醇混勻；注入的磁珠及磁珠結合液的體積為50-150μL，與300-400μL雙蒸水混勻；注入的磁珠洗滌液的體積為500-700μL；注入的核酸洗脫液的體積為50-300μL。