[發明專利]一種豬藍耳病卵黃抗體的制備方法

有效

• 申請號: 201410827855.1
• 申請日: 2014-12-25
• 公開（公告）號: CN104558165B
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發明（設計）人: 蔣春茂;陳曉蘭;武彩紅;賈紀萍;楊海峰;管遠紅;王妲妲;陳毓;周芳
• 申請（專利權）人: 江蘇農牧科技職業學院;蔣春茂
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C07K16/02
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所 32237
• 代理人: 龔擁軍

1.一種豬藍耳病卵黃抗體的制備方法，其特征在于：具體包括如下步驟：

（1）取20-30周齡的健康蛋雞，飼喂一周后，進行首次免疫，在首次免疫后14天、28天分別進行二次免疫和三次免疫；所述的首次免疫、二次免疫和三次免疫的處理方法相同，所述的免疫方法為：肌肉分點免疫豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗0.2ml/羽，同時通過飲水給藥喂食桑葉杜仲提取物5mg/羽；收集免疫后2-6周內所產的免疫豬繁殖與呼吸綜合征疫苗的雞蛋；所述桑葉杜仲提取物由桑葉多糖和杜仲提取物制成，每1000ml桑葉杜仲提取物由桑葉280-320g和杜仲皮50-100g制成；所述豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗采用R98株疫苗；

（2）將步驟（1）收集的免疫豬繁殖與呼吸綜合征疫苗的雞蛋，經75%酒精消毒后，用卵黃分離器分離蛋白，收集卵黃，棄卵黃膜，加卵黃液9倍體積的pH值為5.2醋酸水溶液稀釋，充分攪拌，4℃冰箱中靜置超過6h，10000r/min 4℃離心10min，收集上清液獲得卵黃水提液；

（3）采用凍融法純化卵黃抗體IgY:置卵黃水提液于 -70℃冰箱中過夜，取出，解凍后10000r/min離心15min，棄去沉淀，收集上清液，經0.22μm濾膜過濾后，獲得純化后的豬繁殖與呼吸綜合征卵黃抗體IgY。

2.根據權利要求1所述的豬藍耳病卵黃抗體的制備方法，其特征在于：步驟（1）中所述的蛋雞為羅曼蛋雞或白羽蛋雞。

3.根據權利要求1所述的豬藍耳病卵黃抗體的制備方法，其特征在于：步驟（2）中所述的醋酸水溶液是在1000ml生理鹽水中加入0.1mol/l的冰醋酸，調節pH值為5.2。