[發明專利]一種從大葉千斤拔中提取染料木苷的方法

有效

• 申請號: 201410826874.2
• 申請日: 2014-12-25
• 公開（公告）號: CN104529984A
• 公開（公告）日: 2015-04-22
• 發明（設計）人: 彭開鋒;張鵬;龔云;劉逆夫
• 申請（專利權）人: 株洲千金藥業股份有限公司
• 主分類號: C07D311/36
• 分類號: C07D311/36;C07D311/40
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術領域

本發明涉及天然產物的提取，具體涉及一種從大葉千斤拔中提取染料木苷的方法。

背景技術

染料木苷(Genistin)是一種異黃酮類化合物，在體內代謝具有雌激素樣作用，被稱為植物雌激素類藥物。染料木苷在人體腸道菌群作用下水解成染料木素，通過競爭性地結合雌激素受體而發揮作用，在醫藥行業主要用于治療婦科類疾病。

在現有技術中，專利文獻CN1876671公開了一種從豆粕中提取的大豆異黃酮提取物及提取方法，所述提取物中含有染料木苷、大豆苷和大豆黃苷，該方法提供的產物為異黃酮苷的混合物，且沒有涉及針對染料木苷的分離方法。目前，亟需開發一種適于規模化生產的提取高純度染料木苷的方法。

發明內容

本發明公開了一種從大葉千斤拔中提取染料木苷的方法；該方法的原料豐富易得，工藝簡單可行，污染少，周期短，所得產品純度高，易于規模化制備。

本發明提供了一種從大葉千斤拔中提取染料木苷的方法，所述方法包括以下步驟：

(1)將原料大葉千斤拔切碎，用濃度50～70％的乙醇水溶液回流提取1.5～5h，得提取液；

(2)將步驟(1)所得提取液濃縮后上色譜柱，所述色譜柱中的固定相為大孔吸附樹脂；以體積比15～25:85～75的乙醇-水溶液為流動相進行洗脫，收集洗脫液；

(3)將步驟(2)所得洗脫液濃縮至稠狀浸膏，加入含有2～3％冰醋酸的乙醇，充分溶解，靜置，過濾除去不溶物，將濾液重結晶，用乙醇洗滌晶體，真空干燥，即得染料木苷。

本發明所述步驟(1)中：

所述乙醇水溶液的濃度為乙醇與水的體積比，該濃度優選為60％；

所述步驟(1)中將原料大葉千斤拔切碎優選為將大葉千斤拔切成2-3cm的片段；

所述提取可以提取一次，加入乙醇水溶液的體積為原料大葉千斤拔重量的7.5～8.5倍，優選為8倍，提取時間優選為1.5～5h，進一步優選為4h；也可以以相同濃度的乙醇水溶液提取多次后將提取液合并，優選為提取兩次，其中，第一次在原料中加入占原料大葉千斤拔重量7.5～8.5倍體積的乙醇水溶液，優選為8倍體積，回流提取1.5～2.5小時，優選為2小時，過濾，得第一次提取液和濾渣；在濾渣中加入占原料大葉千斤拔重量5.5～6.5倍體積的乙醇水溶液，優選為6倍體積，回流提取1.5～2.5小時，優選為2小時，過濾，得第二次提取液；將兩次提取所得提取液合并；該步驟所述大葉千斤拔重量的單位為kg，乙醇水溶液體積的單位為L。

本發明所述步驟(2)中：

步驟(1)所得提取液應被濃縮至與色譜柱規格相匹配的、適于上樣的體積，且應確保所有溶質均處于充分溶解狀態；樣品濃縮后，采用常規方法上色譜柱，應使樣品充分吸附到大孔吸附樹脂上，且不浪費；

所述固定相使用的大孔吸附樹脂型號優選為D101，所述固定相中粒度0.3-1.25mm的樹脂顆粒不少于95％；大孔吸附樹脂被填充于色譜柱中，在使用之前，應采用常規方法進行活化處理；

所述流動相中，乙醇-水的體積比通過大量實驗進行篩選得到，在15～25:85～75的范圍內可以將目標化合物染料木苷集中洗脫下來；所述乙醇-水的體積比優選為20:80；

所述流動相洗脫將目標化合物充分洗脫下來且不浪費流動相即可，洗脫體積優選為1.5～2倍于色譜柱體積；洗脫速度為以大孔吸附樹脂為固定相進行洗脫的常規速度；

為了提高洗脫液中染料木苷的純度，在樣品充分吸附到大孔吸附樹脂后、流動相洗脫前，可先用不含乙醇的水進行預洗脫，預洗脫所得產物不作為洗脫液收集；所述預洗脫的體積優選為1.5～2倍色譜柱體積。

本發明所述步驟(3)中：

所述溶解稠狀浸膏的溶劑用量以將浸膏充分溶解且不浪費溶劑為宜，優選為3～5倍稠狀浸膏體積，進一步優選為4倍體積；所述溶劑乙醇中冰醋酸的濃度優選為2.5％，所述濃度為冰醋酸與乙醇的體積比；

所述將濾液重結晶具體為：將濾液在55～65℃下減壓濃縮至原體積的1/2～1/3，優選為在60℃下減壓濃縮至原體積的1/2，自然冷卻后，置于2～4℃下充分析出晶體，優選為4℃下充分析出晶體，過濾除去母液，即得晶體；

所述真空干燥的條件優選為：55～65℃下真空干燥3～5小時，進一步優選為60℃下真空干燥4小時。

作為優選方案，本發明所述方法包括以下步驟：