[發明專利]豬繁殖與呼吸綜合征嵌合病毒RvHBJX及其應用

有效

• 申請號: 201410823151.7
• 申請日: 2014-12-25
• 公開（公告）號: CN104593336B
• 公開（公告）日: 2019-05-17
• 發明（設計）人: 蓋新娜;楊漢春;郭鑫;周磊;張家龍;顏忠;姚晟晨
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/85;C12N15/66;A61K39/12;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

本發明提供了一種豬繁殖與呼吸綜合征嵌合病毒RvHBJX及其應用，屬于病毒基因工程技術領域。本發明的豬繁殖與呼吸綜合征嵌合病毒RvHBJX是以低致病性PRRSV毒株HB?1/3.9為骨架包含高致病性PRRSV毒株JXwn06結構蛋白編碼區的嵌合病毒，該嵌合病毒經MARC?145細胞體外連續傳代80次，該病毒遺傳性質表現穩定；病毒對宿主細胞的適應性隨傳代次數的增加逐漸增強；嵌合病毒傳代60次(P60)及以上對本體動物具有較好的安全性，且接種后能夠對高致病性PRRSV毒株感染提供100％的免疫保護，可作為豬繁殖與呼吸綜合征的疫苗侯選株，用于預防豬繁殖與呼吸綜合征，具有良好的應用前景。

技術領域

本發明涉及病毒基因工程技術領域，具體地，涉及一種豬繁殖與呼吸綜合征嵌合病毒RvHBJX及其應用。

背景技術

豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的一種高度傳染性疾病，主要以懷孕母豬發生流產、早產、產死胎和木乃伊胎等繁殖障礙疾病以及仔豬和生長育肥豬出現呼吸道癥狀為特征(Rossow et al.,1994)。2006年初夏以來，嚴重型PRRS暴發，并迅速席卷我國主要養豬地區，造成大批生豬死亡，給我國養豬業造成巨大經濟損失。疫苗被認為是防控與凈化PRRSV的重要工具。但是，PRRSV感染能引起免疫抑制與持續性感染，減毒活疫苗的長期使用存在毒力返強等潛在風險(Madsen et al.,1998)。感染性克隆技術為新型疫苗的研究提供了技術保障。自從第一株PRRSV的感染性克隆成功構建以來(Meulenberg et al.,1998)，反向遺傳操作技術已用于分析和研究PRRSV的基因結構與功能、病毒RNA合成的調控機制、致病機制，以及新型疫苗的研究。

一般說來，用同源性高的毒株進行免疫能獲得較好的抵抗力。因此將流行毒株的某些基因置換到傳統疫苗中，也許能提高疫苗的免疫效力。Ellingson等人利用MLV疫苗毒、MN184毒株為親本病毒構建了5個嵌合病毒，其中兩個是MLV疫苗毒、MN184毒株5’UTR/ORF1相互置換的病毒，一個是以MLV為骨架置換了MN184ORF5-6的嵌合病毒，一個是以MLV為骨架置換了MN184ORF7-3’UTR的嵌合病毒，一個是以MLV為骨架置換了MN184毒株3’UTR的嵌合病毒。這些嵌合病毒免疫后的攻毒實驗顯示MLV疫苗毒、MN184毒株5’UTR/ORF1相互置換的病毒及以MLV為骨架置換了MN184ORF5-6的嵌合病毒能夠誘導產生與傳統細胞培養疫苗相似的抵抗力。Lee等人用韓國PRRSV流行毒株的結構蛋白編碼區置換了感染性cDNA克隆質粒中的相應區域并拯救出相應的PRRSV嵌合病毒，該病毒能夠被自然感染豬的血清所中和，相應的體內試驗尚未開展。以上結果說明通過嵌合病毒來研制新型疫苗是可行的。

我國先前的分離毒株PRRSV HB-1(sh)/2002(GenBank收錄號AY150312)(Gao etal.,2004)，在全基因組序列上與高致病性毒株的同源性最高(97.2％)，但致病性低。該毒株經MARC-145細胞連續傳代，獲得能在MARC-145細胞中良好增殖的克隆毒株HB-1/3.9(GenBank收錄號EU360130)(冉智光等，2006)，與高致病性毒株的全基因組序列同源性為97.4％。這兩個毒株基因組高度同源而生物學特性，如毒力、致病性、生長特性、免疫原性等差異較大。

發明內容

本發明的目的在于提供一種豬繁殖與呼吸綜合征嵌合病毒；本發明的另一目的在于提供該嵌合病毒作為嵌合疫苗候選株的用途。

本發明首先提供了一種豬繁殖與呼吸綜合征嵌合病毒，命名為RvHBJX，是以低致病性PRRSV毒株HB-1/3.9為骨架，含有高致病性PRRSV毒株JXwn06結構蛋白編碼區的嵌合病毒。

其中，高致病性PRRSV毒株JXwn06結構蛋白編碼區的基因序列如SEQ ID NO.1所示。