[發明專利]食用油過氧化值酶生物傳感器的制備方法

在審

• 申請號: 201410822047.6
• 申請日: 2014-12-25
• 公開（公告）號: CN104535629A
• 公開（公告）日: 2015-04-22
• 發明（設計）人: 廖姍;李中;梁明龍;伍壽勝
• 申請（專利權）人: 桂林中輝科技發展有限公司
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26;G01N27/327
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，具體是食用油過氧化值酶生物傳感器的制備方法。

背景技術

油脂在加工、貯藏、流通、使用等過程中，由于光、熱和空氣中的氧等作用常會發生酸敗變質的復雜變化。一般油脂尤其是富含不飽和脂肪酸的植物油在空氣中氧的作用下會氧化酸敗，在氧化過程中生成過氧化物和氫過氧化物等中間產物，它們很容易分解而產生揮發性和非揮發性脂肪酸、醛、酮和醇等，這些酸敗產物常具有特殊的臭氣和苦澀滋味，大大影響油脂的感官性質，并且造成其營養價值大大下降。油脂中的脂質過氧化物的含量是以每千克油脂中活性氧的毫克當量即過氧化值來表示的，過氧化值是判斷油脂新鮮程度和質量等級的重要標準。

食用油過氧化值的檢測是確保油品質量的關鍵手段，國內外廣泛使用的測定方法主要有高效液相色譜法和化學滴定法。高效液相色譜法需使用大型儀器，實際成本高，難以作為普查使用；而化學滴定法的反應時間長，步驟繁瑣，試劑需提前一周以上時間配制，全部手工操作，易受操作人員的人為因素干擾。碘量法(CB/T5538)是油脂過氧化值國際通用的分析方法，簡單易行，在普通化驗室里就可以進行，但碘量法測定過程易受多種外界因素的影響，如溶液的PH值、溫度、加水量及搖動速度、滴定終點的判斷等因素，使其測定值的波動性大，重復性差，所以造成該法靈敏度低，同時存在取樣量大，難以適應于現代社會所提出的精確、快速、便攜、現場化的食品安全檢測理念。

目前我國各防疫部門檢測食用油過氧化值都按照GB/T5009.37-1996規定的分析方法(化學滴定法)。國內外相繼發表了檢測過氧化值的發明文獻專利，如中國專利(CN87106131.7)“過氧乙酸測定試紙及其制備方法”涉及用試紙測定水溶性消毒液中的過氧乙酸的含量；日本專利(53-30383)“油脂中過氧化物測定試紙的制備方法”是以可溶性淀粉、碘化鉀作為主要成分，都具有如下缺陷：對光和氧敏感，易失效；反應時間長，超過5分鐘；只能定性和半定量測量，不能測出準確的數值等。目前尚未見到有關采用絲網印刷技術產業化制作一次性用于食用油過氧化值檢測酶電極的相關報道。

經對現在技術文獻的檢索發現，中國專利申請號03132054.6名稱為“一種制備二氧化鈦凝膠膜電化學生物傳感器的方法”，該專利中采用二氧化鈦凝膠膜對傳統電極進行修飾，然后采用電化學的方法來檢測過氧化氫。該方法制備修飾電極的過程相當復雜，電極的準備時間超過2小時，制備出的修飾電極穩定性差，修飾電極不能長期保存，當保存時間超過一個月，電極的響應靈敏度下降超過25％，因而不能大范圍推廣使用。

發明內容

本發明的目的在于針對上述現有技術的不足，提供了一種食用油過氧化值的酶生物傳感器的制備方法，使其易于產業化制作和一次性使用，并且大大縮短了樣品處理和檢測時間，從而實現樣品的現場、快速、精確檢測。

本發明的原理如下：

油脂屬于低導電或非導電的、疏水性的物質，因此研究測定油脂的過氧化物成分，就是在有機相中測定有機過氧化物，就需要制備有機相過氧化物酶電極。本發明利用殼聚糖良好的成膜性和較好的粘結能力以及其內部的極性化學基團，將辣根過氧化物酶(HRP)固定在酶生物傳感器檢測電極中工作電極的表面，制成能夠對食用油過氧化值進行快速檢測的電流型生物傳感器，食用油中的過氧化物與酶底物在HRP的催化作用下發生氧化還原反應，產生電子遷移，形成電流，電流強度與過氧化物濃度成正比，檢測范圍為1meq/kg～60meq/kg。

在于電極連線與對電極連成一體組成另一條電極基片，兩條電極基本相互平行，電極連線表面上涂覆一層聚碳酸酯絕緣體，兩條電極基本設置在電極基片上，接線端子和對電極均為裸露的導電材料薄膜，在相互平行的對電極和工作電極兩端覆蓋有隔離片，隔離片與對電極、工作電極垂直放置，隔離片上部覆蓋蓋片，電極、隔離片和蓋片之間的空隙形成加樣孔。本發明涉及一種應用絲網印刷電極檢測食用油過氧化值的酶生物傳感器的制備方法，包括如下步驟：

步驟一，在酶生物傳感器檢測電極的工作電極上采用絲網印刷法印刷一層殼聚糖膜，晾干后在電極的工作電極上印刷辣根過氧化物酶、緩沖溶液、膨脹劑、酶保護劑的混合漿液，50℃干燥；辣根過氧化物酶的濃度為0.5～6.5mg/mL。使用絲網印刷機，使酶膜的厚度達到1～4μm。