[發(fā)明專利]一種高效表達磷脂酶的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410816825.0 | 申請日： | 2014-12-24 |
| 公開（公告）號： | CN104450756A | 公開（公告）日： | 2015-03-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 吳敬;宿玲恰;吉得寧 | 申請（專利權(quán)）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N15/55 | 分類號： | C12N15/55;C12N15/81;C12N9/16;C11B3/00 |
| 代理公司： | 北京愛普納杰專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人： | 張勇 |
| 地址： | 214122 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 高效 表達 磷脂酶 方法 | ||
1.一種編碼磷脂酶A1的基因，其堿基序列如SEQ?ID?NO.1所示。
2.一種高效表達所述磷脂酶A1的方法，其特征在于，是將SEQ?ID?NO.1所示的基因序列與表達載體連接，然后將重組表達載體轉(zhuǎn)化入畢赤酵母中，發(fā)酵培養(yǎng)重組菌獲得磷脂酶A1。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述表達載體是pPIC9K或pPICZα。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，將重組菌活化后，接入裝液量30-40％發(fā)酵罐，以氨水控制pH值為5-6，培養(yǎng)溫度28-30℃，溶氧維持在30％左右，當甘油耗盡、溶氧迅速上升，開始流加甘油補料液，當菌體濃度達到OD600＝95-105時，停止補料；保持基質(zhì)匱乏狀態(tài)約1h后，開始誘導階段，設(shè)置誘導溫度28-30℃，添加0.3-0.5％甲醇，待重組菌適應(yīng)甲醇，溶氧開始下降后，維持甲醇濃度0.3-0.5％，誘導磷脂酶A1表達。
5.根據(jù)權(quán)利要求2-4任一所述的方法，其特征在于，將重組菌活化后，接入裝液量0.9L的3L發(fā)酵罐，以25％氨水控制pH5，培養(yǎng)溫度30℃，通過與攪拌轉(zhuǎn)速偶聯(lián)和調(diào)節(jié)通氣量將溶氧維持在30％左右，當溶氧迅速上升，表明培養(yǎng)基中的甘油已經(jīng)耗盡，開始流加50％的甘油補料液，當菌體濃度達到OD600＝100時，停止補料，保持基質(zhì)匱乏狀態(tài)約1h后，開始誘導階段，設(shè)置誘導溫度28℃，添加0.5％甲醇，待重組菌適應(yīng)甲醇，溶氧開始下降后，通過甲醇電極維持甲醇濃度0.5％，誘導磷脂酶A1表達。
6.根據(jù)權(quán)利要求2-4任一所述的方法，其特征在于，發(fā)酵培養(yǎng)基含有硫酸鈣0.9-1.0g/L，硫酸鎂7-8g/L，氫氧化鉀4-5g/L，硫酸鉀18-20g/L，甘油30-35g/L，磷酸25-28ml/L，CuSO4·5H2O?6-7g/L，KI?0.08-1.0g/L，MnSO4·H2O?3g/L，Na2MoO3·2H2O?0.2g/L，H3BO3?0.02g/L，CoCl2?0.5g/L，ZnCl2?20g/L，F(xiàn)eSO4·7H2O?65-68g/L，生物素0.2g/L，H2SO4?5-6g/L。
7.攜帶權(quán)利要求1所述基因的轉(zhuǎn)化體。
8.權(quán)利要求1所述基因編碼的磷脂酶A1。
9.權(quán)利要求8所述磷脂酶A1在油脂脫膠中的應(yīng)用。
10.權(quán)利要求7所述轉(zhuǎn)化體在油脂脫膠中的應(yīng)用。
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