[發明專利]產纖維素酶和產納他霉素的重組利迪鏈霉菌與應用

在審

• 申請號: 201410815257.2
• 申請日: 2014-12-24
• 公開（公告）號: CN104480135A
• 公開（公告）日: 2015-04-01
• 發明（設計）人: 吳慧玲;劉偉成;李錦錦;劉霆;董丹;張濤濤;盧彩鴿;張殿朋;劉德文;田兆豐
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: C12N15/76
• 分類號: C12N15/76;C12N1/21;C12N9/42;C12P19/62;A01N63/00;A01N63/02;A01P3/00;C12R1/465
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.構建重組利迪鏈霉菌的方法，包括將血紅蛋白的編碼基因和纖維素酶的編碼基因的表達載體導入作為宿主菌的利迪鏈霉菌中，得到產纖維素酶和納他霉素的重組利迪鏈霉菌的步驟；

所述血紅蛋白是如下A1)或A2)的蛋白質：

A1)氨基酸序列是序列表中SEQ?ID?No.3的蛋白質；

A2)將序列表中SEQ?ID?No.3中的一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有血紅蛋白功能的由A1)衍生的蛋白質；

所述纖維素酶是如下B1)或B2)的蛋白質：

B1)氨基酸序列是序列表中SEQ?ID?No.4的蛋白質；

B2)將SEQ?ID?No.4中的一個或幾個氨基酸殘基取代和/或缺失和/或添加且具有纖維素酶功能的由B1)衍生的蛋白質；

所述表達載體從上游至下游的方向含有紅霉素抗性基因啟動子、所述纖維素酶的編碼基因、所述紅霉素抗性基因啟動子、所述血紅蛋白的編碼基因。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述血紅蛋白的編碼基因為下述A11)-A13)中的任一種DNA分子：

A11)編碼序列為序列表中SEQ?ID?No.1的第7-447位核苷酸或SEQ?ID?No.2的第1692-2132位核苷酸的cDNA分子或基因組DNA；

A12)在嚴格條件下與A11)限定的DNA分子雜交且編碼所述血紅蛋白的cDNA分子或基因組DNA；

A13)與A11)或A12)限定的DNA分子具有75％以上的同一性且編碼所述血紅蛋白的cDNA分子或基因組DNA；

所述纖維素酶的編碼基因為下述B11)-B13)中的任一種DNA分子：

B11)編碼序列為序列表中SEQ?ID?No.1的第653-2134位核苷酸或SEQ?ID?No.2的第7-1488位核苷酸cDNA分子或基因組DNA；

B12)在嚴格條件下與B11)限定的DNA分子雜交且編碼所述纖維素酶的cDNA分子或基因組DNA；

B13)與B11)或B12)限定的DNA分子具有75％以上的同一性且編碼所述纖維素酶的cDNA分子或基因組DNA。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述表達載體中所述血紅蛋白的編碼基因和所述纖維素酶的編碼基因均由紅霉素抗性基因啟動子啟動。

4.根據權利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述紅霉素抗性基因啟動子為SEQ?ID?No.1的第462-652位核苷酸或SEQ?ID?No.2的第1501-1691位核苷酸所示的DNA分子。

5.根據權利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述表達載體為含有核苷酸序列為序列表中SEQ?ID?No.2的第7-2134位核苷酸所示的DNA片段的表達載體。

6.由權利要求1-5中任一所述方法得到的重組利迪鏈霉菌。

7.權利要求6所述的重組利迪鏈霉菌在生產那他霉素和纖維素酶中的應用。

8.權利要求6所述的重組利迪鏈霉菌在生產那他霉素或纖維素酶中的應用。

9.權利要求6所述的重組利迪鏈霉菌或其代謝物的下述任一應用：

1)所述重組利迪鏈霉菌或其代謝物在抑制植物病原真菌中的應用；

2)所述重組利迪鏈霉菌或其代謝物在制備植物病原真菌抑制劑中的應用；

3)所述重組利迪鏈霉菌或其代謝物在制備植物真菌病害抑制劑中的應用；

4)所述重組利迪鏈霉菌或其代謝物在抑制植物真菌病害中的應用。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于：所述植物病原真菌為下述至少一種：甘藍枯萎病菌(Fusarium?oxysporum?f.sp.conglutinans)和西瓜枯萎病菌(F.oxysporum?f.sp.niveum)；

所述植物真菌病害為下述至少一種：由甘藍枯萎病菌(Fusarium?oxysporum?f.sp.conglutinans)引起的病害和由西瓜枯萎病菌(F.oxysporum?f.sp.niveum)引起的病害。