[發(fā)明專利]一種γ -谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶與伴侶蛋白共表達(dá)重組質(zhì)粒構(gòu)建方法及應(yīng)用在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201410812443.0 | 申請(qǐng)日： | 2014-12-23 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN104560849A | 公開（公告）日： | 2015-04-29 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 殷志敏;王期;蔣毅;蘭蕾 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 南京師范大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N1/21 | 分類號(hào)： | C12N1/21;C12N15/70;C12P13/04;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京知識(shí)律師事務(wù)所 32207 | 代理人： | 盧亞麗 |
| 地址： | 210097 江*** | 國(guó)省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 谷氨酰轉(zhuǎn) 肽酶 伴侶 蛋白 表達(dá) 重組 質(zhì)粒 構(gòu)建 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種具有谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶酶活的大腸桿菌基因工程菌，其特征在于：該基因工程菌是以大腸桿菌BL21(DE3)為宿主菌，宿主菌中共轉(zhuǎn)化有伴侶蛋白表達(dá)質(zhì)粒pG-Tf2與谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶表達(dá)質(zhì)粒。
2.權(quán)利要求1所述大腸桿菌基因工程菌BL21/C4在生產(chǎn)茶氨酸中的應(yīng)用。
3.一種利用谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶重組質(zhì)粒生產(chǎn)茶氨酸的方法，其特征在于：是用伴侶蛋白表達(dá)質(zhì)粒pG-Tf2與谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化大腸桿菌得到共轉(zhuǎn)化子，誘導(dǎo)培養(yǎng)該共轉(zhuǎn)化子；以經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)的共轉(zhuǎn)化子為酶源，谷氨酰胺和乙胺為轉(zhuǎn)化底物，酶促合成茶氨酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)條件如下：將共轉(zhuǎn)化子菌液接入含有氨芐青霉素和氯霉素抗性液體TB培養(yǎng)基中，其中，TB培養(yǎng)基中加有10ng/ml四環(huán)素作為伴侶蛋白的誘導(dǎo)劑；振蕩培養(yǎng)至OD600值為1.2后，加入終濃度為0.5mM的IPTG，20℃下誘導(dǎo)16h。
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