[發(fā)明專利]一種醋酸普蘭林肽的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410810773.6
• 申請(qǐng)日: 2014-12-23
• 公開（公告）號(hào): CN104530214B
• 公開（公告）日: 2018-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 謝義鵬;李元波;曹康平;王強(qiáng);伍普華;袁森林;王穎
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)四川海蓉藥業(yè)有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/575
• 分類號(hào): C07K14/575;C07K1/20;C07K1/16;C07K1/10;C07K1/04
• 代理公司: 四川省成都市天策商標(biāo)專利事務(wù)所 51213
• 代理人: 楊剛

本發(fā)明公開了一種醋酸普蘭林肽的制備方法，包括了它的合成與純化，屬于藥物制備領(lǐng)域。本發(fā)明通過1)Fmoc?Tyr(tBu)?Rink Amide?MBHA Resin氨基樹脂的制備、2)全肽樹脂的合成、3)全肽樹脂的切割、4)中間肽的環(huán)化、5)初步純化、6)精制等過程采用簡(jiǎn)便實(shí)用的空氣氧化法制得了醋酸普蘭林肽，其粗品僅需經(jīng)過一次反相高效液相色譜純化和一次精制即可制得精制液，其精制品的純度大于99％，純化總收率高達(dá)51.2％，有效的提高了產(chǎn)品生產(chǎn)效率和質(zhì)量，制備過程簡(jiǎn)單，操作方便。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及藥物的制備方法，特別是一種降糖多肽類藥物醋酸普蘭林肽的制備方法。

背景技術(shù)

醋酸普蘭林肽(Cas No:196078-30-5)是一種由美國(guó)Amylin公司研發(fā)的人胰淀素類似物，主要用于治療使用胰島素仍無法達(dá)到理想的血糖控制效果的Ⅰ型與Ⅱ糖尿病，其中胰淀素是指由胰腺β細(xì)胞產(chǎn)生的一種協(xié)助機(jī)體進(jìn)行血糖調(diào)節(jié)的激素。普蘭林肽的分子式為C₁₇₁H₂₆₇N₅₁O₅₃S₂，其對(duì)應(yīng)的分子量為3949.4，氨基酸序列為：Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-Leu-Val-His-Ser-Ser-Asn-Asn-phe-Gly-Pro-Ile-Leu-Pro-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Tyr-NH₂。美國(guó)專利US5424394中公開了采用依次偶聯(lián)氨基酸區(qū)段的方法合成醋酸普蘭林肽，另一份美國(guó)專利US2009055867中也公開了先合成四個(gè)氨基酸區(qū)段,再將這些氨基酸區(qū)段依次偶合，從而合成醋酸普蘭林肽的方法，以上方法均采用了條件溫和的Fmoc固相合成法，但所使用的構(gòu)建二硫鍵的碘氧化法不夠簡(jiǎn)便實(shí)用，且未詳細(xì)提及醋酸普蘭林肽的純化過程；在現(xiàn)有中國(guó)專利CN101525382中公開了醋酸普蘭林肽的純化方法，該法需要經(jīng)過兩次高效液相純化和一次陰離子交換轉(zhuǎn)鹽制得純度大于98％的精制品，其過程復(fù)雜，純化收率僅為40.3％。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明希望提供一種制備過程簡(jiǎn)單實(shí)用的醋酸普蘭林肽的制備方法，包括了醋酸普蘭林肽的合成與純化。

本發(fā)明首先公開了一種醋酸普蘭林肽的制備方法，包括以下步驟：

1)Fmoc-Tyr(tBu)-Rink Amide-MBHA Resin氨基樹脂的制備

以Fmoc-Tyr(tBu)-OH和替代度為0.1～0.5mmol/g的Rink Amide-MBHA Resin氨基樹脂為起始原料，通過Fmoc固相合成法制備得到Fmoc-Tyr(tBu)-Rink Amide-MBHA Resin氨基樹脂；

2)全肽樹脂的合成

將由步驟1)得到的Fmoc-Tyr(tBu)-Rink Amide-MBHA Resin氨基樹脂按照肽序在偶聯(lián)劑作用下依次偶聯(lián)除Tyr外剩余的每個(gè)氨基酸的保護(hù)氨基酸，每次偶聯(lián)一個(gè)氨基酸的保護(hù)氨基酸后形成新的氨基樹脂，將所述新的氨基樹脂在脫保護(hù)劑的作用下進(jìn)行脫保護(hù)，再偶聯(lián)下一個(gè)氨基酸的保護(hù)氨基酸，以此循環(huán)至全部氨基酸連接完畢，得到全肽樹脂，其中所述保護(hù)氨基酸為連接有保護(hù)基團(tuán)的氨基酸，所述脫保護(hù)為將所述保護(hù)基團(tuán)從所述保護(hù)氨基酸上脫除的過程；

3)全肽樹脂的切割

將由步驟2)得到的全肽樹脂通過裂解液進(jìn)行裂解，制得普蘭林肽的中間肽；

4)中間肽的環(huán)化

通過空氣氧化法在步驟3)制得的中間肽的內(nèi)部構(gòu)建出二硫醚鍵，得到粗肽，此處所述空氣氧化法為將中間肽溶入純水后形成混合液，將混合液經(jīng)PH調(diào)節(jié)后暴露在空氣中自然氧化的方法；

5)初步純化