[發(fā)明專利]一種高危型人乳頭瘤病毒的檢測和分型試劑盒及其應用

有效

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• 申請日: 2014-12-19
• 公開（公告）號: CN105755169B
• 公開（公告）日: 2020-03-10
• 發(fā)明（設計）人: 白艷軍;姚見兒;胡可
• 申請（專利權）人: 上海透景生命科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/93
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

本發(fā)明涉及一種高危型人乳頭瘤病毒的檢測和分型試劑盒及其應用。揭示了一類特別適合于診斷高危型人乳頭瘤病毒(HPV)以及對HPV16和HPV18進行分型的檢測試劑，所述檢測試劑經(jīng)過合理的設計、優(yōu)選而獲得，用于PCR擴增時特異性良好、擴增效率高、靈敏度高，且可以同時檢測多種高危型病毒，檢測程序簡單易操作。本發(fā)明人還優(yōu)化了PCR擴增反應程序，進一步提高了擴增效率。

技術領域

本發(fā)明涉及病毒診斷領域，更具體地，本發(fā)明涉及一種高危型人乳頭瘤病毒的檢測和分型試劑盒及其應用。

背景技術

宮頸癌是全球婦女中發(fā)病率僅次于乳腺癌的最常見的惡性腫瘤，世界范圍內每年約有50萬的宮頸癌新發(fā)病例。通過宮頸篩查可以將宮頸癌的發(fā)病率大大降低。

大量的流行病學和分子生物學研究證明人乳頭瘤病毒(Human Papilloma Virus，HPV)感染是宮頸癌和癌前病變發(fā)生的主要因素：世界衛(wèi)生組織曾經(jīng)在22個國家進行的調查結果顯示，有99.9％的宮頸癌患者可以檢測到HPV感染；國際癌癥研究協(xié)會(IARC)1995年宣布HPV感染是宮頸癌的主要病因。人乳頭瘤病毒是一種屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬，是球形DNA病毒。目前已分離出130多種，約有30多種可以感染人的生殖道黏膜。大量的科學研究發(fā)現(xiàn)，HPV基因型不同，其致癌力、宮頸癌病理分型以及宮頸癌的預后均有所不同。根據(jù)HPV感染人生殖道黏膜后的致癌性不同將其分為高危和低危兩大類別，低危型包括6、11、54、40、42、43和44等，以6和11最為常見；高危型包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、73和83等，其中以16和18最為常見。目前WHO及IRAC確認的14種致宮頸癌的高危型包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66及68。

對HPV進行分型檢測可以預測受檢者的發(fā)病風險度，決定其篩查間隔；更可以區(qū)分持續(xù)感染和一過性感染，以便及早進行治療，以降低發(fā)生率和死亡率；用于手術后的追蹤，確定是否將病灶清除干凈，便于治療后的隨訪；指導HPV疫苗的研究及使用。

HPV的檢測技術發(fā)展很快，出現(xiàn)了很多HPV檢測技術，大致可分為以下幾種：(1)細胞學檢查，如傳統(tǒng)巴氏涂片(CV)、液基薄層細胞學技術(TCT)、計算機輔助細胞檢查系統(tǒng)，此類技術操作簡單、價格低廉、適宜作初步篩查，但應用細胞病理學檢測HPV存在靈敏度低、特異性差、且無法進行HPV分型檢測；(2)感染組織中HPV蛋白的檢測，針對HPV抗原(主要是衣殼蛋白制備抗體)通過免疫學方法進行檢測，如ELISA、免疫沉淀法等，此類方法原理明確、操作簡單，但由于HPV至今尚不能在體外培養(yǎng)，且其免疫原型較弱，導致血清學方法檢測靈敏度低；(3)HPV基因組檢測，如Southern雜交法、原位雜交法、雜交捕獲法、以及PCR類檢測方法。

Southern雜交法是應用酚氯仿提取純化DNA，通過限制酶消化、電泳、變性、轉膜和放射性標記探針雜交鑒定HPV亞型。此法是以雜交片段大小與雜交的嚴格性為基礎，具有較好的靈敏度，但也具有耗費人力、試驗步驟復雜和使用放射性探針等缺點。

原位雜交法應用組織或細胞在病理切片上和分子探針進行HPV DNA雜交，既可觀察組織學形態(tài)變化，又可檢測HPV表達的狀況，是理想的病理學檢測及研究方法。目前國內尚缺乏穩(wěn)定的探針，只可分為高危、低危型，操作較復雜，不適于大規(guī)模普查。

雜交捕獲法原理是利用對抗體捕獲信號放大和化學發(fā)光的檢測。此為經(jīng)美國FDA認證后用于30歲以上女性宮頸癌的初篩方法，僅用于細胞學標本，是國內婦科學會指定的檢查方法。第二代雜交捕獲法可檢測13種高危型HPV。此種方法具有良好的靈敏度和特異性，但其存在交叉污染、費用昂貴、且不便于HPV分型等缺點。