[發明專利]一種基于活性篩選的牡丹皮藥材及制劑檢測方法

有效

• 申請號: 201410809235.5
• 申請日: 2014-12-23
• 公開（公告）號: CN104535677A
• 公開（公告）日: 2015-04-22
• 發明（設計）人: 封亮;賈曉斌;張明華;顧俊菲;汪春飛
• 申請（專利權）人: 江蘇省中醫藥研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種基于活性篩選的牡丹皮藥材及制劑檢測方法，屬于中醫藥研究方法學領域。

背景技術

目前國內外中藥藥材、中間體、制劑質量控制的方法是在化學成分研究的基礎上,建立中藥中的某一或兩個有效成分(主成分)的定性、定量分析方法，進而控制中藥的質量。但這種質量控制方法未能體現中藥整體特點，也未能給出這些質控指標與藥效相關的證據，更值得關注的是這些成分的質量控制不是越高越好，而是不同的成分應該控制在一定范圍比例內，即“組分結構”。很多研究案例結果顯示中藥(復方)的最佳藥效是多種藥材或組分之間組成結構的生物學反映。

牡丹皮為雙子葉植物，是毛茛科植物牡丹Paeonia?suffruticosaAndr.的干燥的根皮。產于安徽、四川、河南、山東等地。牡丹皮始載于《神農本草經》，列為中品，具有清熱涼血、活血化淤、退虛熱等功效。現代學者對牡丹皮的化學成分進行了許多藥理效應研究，認為其具有心血管系統作用、保肝、降血糖、降血脂、降血壓等作用，還具有中樞神經系統作用。對牡丹皮及其產品的質量控制，2010年《中國藥典》質量控制標準規定藥材含丹皮酚不得少于1.2％，該質控標準不能客觀準確反應牡丹皮的藥材質量。在《中國藥典》中收錄的近40種成方制劑，對于牡丹皮藥材來說，質控指標僅一個或不涉及。

本技術基于活性成分的篩選，結合主成分分析、聚類分析等手段，揭示了牡丹皮藥材、中間體、制劑的組成結構特征，確定多成分指標的質控范圍，為牡丹皮藥材及制劑提供一種多組分質量控制方法。

附圖說明

圖1腎系膜細胞固相化牡丹皮提取物產物色譜圖(A)及化學結構圖(B)，其中(a)牡丹皮孵育液；(b)最后一次PBS洗滌液；(c)空白解離液；(d)固相化產物解離液

圖2牡丹皮提取物抑制AGEs生成色譜圖(A)及化學結構圖(B)，其中(a)牡丹皮孵育液；(b)丙酮醛孵育液；(c)牡丹皮與丙酮醛孵育液

圖3牡丹皮提取物抑制血小板聚集生成色譜圖(A)及化學結構圖(B)，其中(a)牡丹皮孵育液；(b)最后一次PBS洗滌液；(c)空白解離液；(d)固相化產物解離液

圖4HPLC法測定的不同產地牡丹皮(A)及成分聚類分析結果(B)，注：從前向后依次為湖南、安徽、甘肅、重慶、四川、貴州、河南、河北、浙江、山東產地的牡丹皮吸收峰。

圖5效應物質對AGEs誘導的SOD活性(A)及MDA含量(B)的影響

圖6效應物質系膜細胞FN蛋白表達的影響

圖7效應物質血管內皮細胞凋亡的影響，其中：a,200μg/mL牛血清白蛋白；b,200μg/mL?AGEs；c,氨基胍(10μM)+200μg/mL?AGEs；d,丹皮酚pae(10-4M)+200μg/mL?AGEs；e,三沒食子酰葡萄糖(10-4M)+200μg/mL?AGEs；f,五沒食子酰葡萄糖(10-4M)+200μg/mL?AGEs；g,芍藥苷(10-4M)+200μg/mL?AGEs；h,氧化芍藥苷(10-4M)+200μg/mL?AGEs；i,苯甲酰芍藥苷(10-4M)+200μg/mL?AGEs.AGEs組和BSA組相比,###P<0.001；樣品組與AGEs組相比,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。

圖8牡丹皮藥材、中間體、配方顆粒6個有效成分HPLC色譜圖

圖9不同產地牡丹皮對腎系膜細胞ICAM-1、TGF-β1和FN表達的影響及藥效聚類分析

發明內容

解決的技術問題：

本發明針對牡丹皮藥材、中間體及制劑產品的質量檢測現狀，提供一種基于高效液相色譜法的牡丹皮藥材、中間體及制劑產品質量檢測方法，通過主成分分析和聚類分析統計方法，獲得主要的質控指標，并經藥理活性評估證明其有效，確定指標成分的控制范圍，為一種基于活性篩選的牡丹皮藥材及制劑檢測方法。

技術方案：

基于中醫藥整體性特點，采用現代活性成分篩選技術篩選牡丹皮藥材中多個活性成分，結合數理統計聚類分析和主成分分析，確定與藥效相關的6個主要成分，經抗AGEs誘導的腎系膜細胞和血管內皮細胞的活性評估，并確定這些成分的組成結構特征及檢測范圍，對其藥材、中間體、制劑產品進行質量檢測。

本發明提供的一種基于活性篩選的牡丹皮藥材及制劑檢測方法，其主要包括以下步驟: