[發明專利]一種疏水色譜純化激肽釋放酶的方法

在審

• 申請號: 201410807827.3
• 申請日: 2015-08-03
• 公開（公告）號: CN104498460A
• 公開（公告）日: 2015-07-29
• 發明（設計）人: 劉冠男;林曉磊;孫延年
• 申請（專利權）人: 青島康原藥業有限公司
• 主分類號: C12N9/64
• 分類號: C12N9/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種疏水色譜純化激肽釋放酶的方法，該方法通過疏水色譜等現代生物分離技術，提高了純化激肽釋放酶的效率，保持激肽釋放酶的效價穩定。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：以激肽釋放酶原為原料，依次經過離子交換層析、鹽析、超濾、熱原處理、透析、疏水色譜、凍干等工序純化得到激肽釋放酶。

3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于所述純化工藝包括如下步驟：

1）將激肽釋放酶原用醋酸緩沖液溶解，離心，上清液加入離子交換樹脂，攪拌、吸附、漂洗、洗脫；

2）調節pH值后加入固體硫酸銨進行鹽析，靜置過夜，過濾，收集濾餅；

3）加入磷酸鹽緩沖液攪拌調節pH值，超濾；

4）超濾液加入磷酸鈉溶液和醋酸鈣溶液后，調節pH攪拌，離心，棄沉淀物；

5）取上述濾液置于于透析袋中，透析4～6天；

6）疏水色譜，用2種洗脫液進行洗脫，最終收集含激肽釋放酶活性峰的洗脫液，-20℃保存；

7）調節pH值，裝盤、凍干，得激肽釋放酶。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于離子交換樹脂選AmheriteCG-50,并且m(樹脂)：m（粗制品）=50：1。

5.如權利要求3所述的方法，其特征在于離子交換層析選用洗脫液為0.01-0.3mol/L，PH3-8的NaCL溶液。

6.如權利要求3所述的方法，其特征在于鹽析工序中每升提取液中加入500g硫酸銨。

7.如權利要求3所述的方法，其特征在于：所述疏水色譜快膠柱包括：Butyl-Sepharose?2B?FF,Butyl-Sepharose?4B?FF,Butyl-Sepharose?6B?FF，Butyl-Sepharose?CL-2B?FF,Butyl-Sepharose?CL-4B?FF,Butyl-Sepharose?CL-6B?FF;。

8.如權利要求3所述的方法，其特征在于：所述疏水色譜條件為：平衡液選用含0.5-3mol/L?(NH₄)₂SO₄的0.01-0.3mol/L，PH3-8的NaAc-HAc緩沖液,流速控制在1~5mL/min左右，洗脫液選用0.5-3mol/L?的(NH₄)₂SO₄溶液和不含(NH₄)₂SO₄平衡緩沖液。

9.如權利要求1～7所述的方法，其特征在于：疏水色譜純化所得激肽釋放酶效價高達1500～1800iu/mg。