[發(fā)明專利]肌酐衍生物、肌酐免疫原及其特異性抗體與肌酐檢測(cè)試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410799524.1
• 申請(qǐng)日: 2014-12-20
• 公開（公告）號(hào): CN104557722A
• 公開（公告）日: 2015-04-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 虞留明;張華;伍勇;封颯颯;成志鵬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州博源醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號(hào): C07D233/88
• 分類號(hào): C07D233/88;C07K14/765;C07K14/795;C07K14/47;C07K16/44;G01N33/70
• 代理公司: 無(wú)
• 代理人: 無(wú)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種肌酐衍生物、肌酐免疫原及其特異性抗體與肌酐檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)

肌酐(Creatinine)，其結(jié)構(gòu)式如式(Ⅲ)所示：

肌酐是一種低分子量的含氮化合物，是人體內(nèi)肌酸代謝的終產(chǎn)物。肌酐是臨床常規(guī)腎功能指標(biāo)之一，臨床上主要用于嚴(yán)重腎小球病變引起的腎功能不全、腎炎、尿毒癥等腎臟疾病的診斷和療效觀察等。血清肌酐升高意味著腎功能的損害，是了解腎臟功能的重要指標(biāo)，同時(shí)對(duì)冠狀動(dòng)脈病變程度、高血壓、糖尿病等有可靠的診斷價(jià)值；尿肌酐排出量可作為肌肉量的指標(biāo)，肌酐的產(chǎn)生量比較恒定，當(dāng)腎功能損傷不嚴(yán)重時(shí)，尿中肌酐的排泄量少受尿液濃縮和稀釋的影響，故尿中肌酐濃度的測(cè)定常用作尿中其他物質(zhì)排泄?jié)舛鹊膮⒄瘴铩＜◆鳛橹匾哪I功能指標(biāo)，其含量檢測(cè)為體外診斷，與供體無(wú)接觸，無(wú)不良、致死報(bào)告，操作簡(jiǎn)單、快速，可廣泛應(yīng)用于臨床，其臨床應(yīng)用的安全性和可靠性已得到驗(yàn)證。

肌酐測(cè)定的方法較多，目前國(guó)內(nèi)外檢測(cè)肌酐含量主要使用化學(xué)測(cè)定法(堿性苦味酸法)、高效液相色譜法、酶法等方法。堿性苦味酸法非特異的色素原干擾因素較多，需要與陽(yáng)離子交換樹脂法結(jié)合使用；高效液相色譜法不適用于大批量臨床樣本的檢測(cè)，通常只能作為肌酐測(cè)定的參考方法；酶法雖然特異性較高、準(zhǔn)確性較好，但是酶試劑價(jià)格昂貴、且不易保存。因此，這些方法都不適合臨床廣泛應(yīng)用。目前市場(chǎng)上缺乏穩(wěn)定性好、靈敏度高、特異性強(qiáng)的肌酐檢測(cè)試劑，尤其是質(zhì)量好的自動(dòng)化檢驗(yàn)試劑，因此，仍需要對(duì)現(xiàn)有的肌酐測(cè)定方法進(jìn)行改進(jìn)，以提供一種達(dá)到臨床要求、實(shí)用性強(qiáng)、性價(jià)比高，可應(yīng)用于全自動(dòng)生化分析儀的肌酐 測(cè)定方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種肌酐衍生物、肌酐免疫原及其特異性抗體與肌酐檢測(cè)試劑盒，以改善現(xiàn)有技術(shù)中肌酐測(cè)定方法穩(wěn)定性差、靈敏度低，無(wú)法進(jìn)行自動(dòng)化分析的缺陷。

根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種肌酐衍生物，其具有式(Ⅰ)所示的結(jié)構(gòu)式：

其中，R為連接基團(tuán)-(CH₂)_n-COO-，n為1至20之間的整數(shù)。本發(fā)明的肌酐衍生物具備制備成具有免疫原性的肌酐免疫原的基本結(jié)構(gòu)，為制備新的肌酐檢測(cè)試劑提供了結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，還提供了一種肌酐免疫原，其具有式(Ⅱ)所示的結(jié)構(gòu)式：

其中，R為連接基團(tuán)-(CH₂)_n-COO-，n是1至20之間的整數(shù)，載體為具有免疫原性的蛋白質(zhì)或多肽。本發(fā)明的肌酐免疫原免疫原性高，能夠刺激動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，產(chǎn)生高效價(jià)的抗肌酐特異性抗體，且具有很強(qiáng)的反應(yīng)原性，適合作為體外檢測(cè)肌酐含量的競(jìng)爭(zhēng)性試劑。

當(dāng)n＝1時(shí)，上述肌酐免疫原中的R為-CH₂-COO-。適用于上述肌酐免疫原的載體通常情況下選用蛋白質(zhì)作為載體，不過(guò)其他足夠大的具備免疫原性的物質(zhì)也可以作為載體。最常用的免疫原性載體包括血清蛋白，血藍(lán)蛋白(KLH)和甲狀腺球蛋白。本發(fā)明中的載體優(yōu)選為血清蛋白。血清蛋白來(lái)源廣泛、簡(jiǎn)單易得且免疫原性高。

根據(jù)本發(fā)明的又一方面，還提供了一種抗肌酐特異性抗體，由免疫原免疫動(dòng)物后生產(chǎn)得 到，抗體由上述任一種肌酐免疫原免疫動(dòng)物后生產(chǎn)得到。本發(fā)明中所指的“抗體”不僅僅指完整的蛋白分子抗體，也包括保留完整抗體特異性結(jié)合能力的多肽片斷抗體或者多肽片段抗體的衍生物。本發(fā)明的抗體可以是為多克隆抗體也可以是單克隆抗體，優(yōu)選為多克隆抗體。

本發(fā)明的抗體可以通過(guò)現(xiàn)有技術(shù)制備得到。獲得多克隆抗體的典型方法是使用單一的免疫原，在加或者不加佐劑后，在動(dòng)物的一個(gè)或者多個(gè)部位進(jìn)行免疫，宿主動(dòng)物包括：兔，山羊，小鼠，綿羊，豚鼠或馬。持續(xù)免疫一直進(jìn)行，直至抗體效價(jià)達(dá)到最高。動(dòng)物定時(shí)采血得到適量的特異抗血清，抗血清可以純化。單克隆抗體可通過(guò)體細(xì)胞雜交技術(shù)來(lái)制備。

根據(jù)本發(fā)明的再一方面，還提供了一種肌酐免疫原的制備方法，該制備方法包括制備上述肌酐衍生物的步驟和將上述肌酐衍生物與載體進(jìn)行連接，得到肌酐免疫原的步驟。通過(guò)上述方法制備得到的肌酐衍生物與具有免疫原性的蛋白質(zhì)或多肽連接在一起，即可得到本發(fā)明的具有強(qiáng)免疫原性的肌酐免疫原，且該制備方法操作簡(jiǎn)單。