[發明專利]肌酐衍生物、肌酐免疫原及其特異性抗體與肌酐檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201410799524.1
• 申請日: 2014-12-20
• 公開（公告）號: CN104557722A
• 公開（公告）日: 2015-04-29
• 發明（設計）人: 虞留明;張華;伍勇;封颯颯;成志鵬
• 申請（專利權）人: 蘇州博源醫療科技有限公司
• 主分類號: C07D233/88
• 分類號: C07D233/88;C07K14/765;C07K14/795;C07K14/47;C07K16/44;G01N33/70
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

1.一種肌酐衍生物，其特征在于，具有式(Ⅰ)所示的結構式：

其中，R為連接基團-(CH₂)_n-COO-，n為1至20之間的整數。

2.一種肌酐免疫原，其特征在于，具有式(Ⅱ)所示的結構式：

其中，R為連接基團-(CH₂)_n-COO-，n是1至20之間的整數，載體為具有免疫原性的蛋白質或多肽；優選所述R為-CH₂-COO-，所述載體為血清蛋白、血藍蛋白或甲狀腺球蛋白。

3.一種抗肌酐特異性抗體，由免疫原免疫動物后生產得到，其特征在于，所述抗肌酐特異性抗體由權利要求2所述的肌酐免疫原免疫動物后得到。

4.根據權利要求3所述的抗體，其特征在于，所述抗體為完整的蛋白分子或具有與肌酐特異性結合的能力的多肽片段。

5.根據權利要求3所述的抗體，其特征在于，所述抗體為多克隆抗體或單克隆抗體。

6.根據權利要求3所述的抗體，其特征在于，所述抗體由所述肌酐免疫原免疫兔、山羊、小鼠、綿羊、豚鼠或馬后得到。

7.一種肌酐免疫原的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括：

制備權利要求1所述的肌酐衍生物；以及

將所述肌酐衍生物與載體連接，得到所述肌酐免疫原；

其中，所述載體為具有免疫原性的蛋白質或多肽；制備所述的肌酐衍生物的步驟包括：

步驟S1，將肌酐與鹵代-(CH₂)_n-COO-叔丁酯在二甲基甲酰胺環境下進行取代反應，得到2-(CH₂)_n-COO-叔丁酯肌酐；以及

步驟S2，將所述2-(CH₂)_n-COO-叔丁酯肌酐溶于強酸溶液中得到反應液，對所述反應液在45～55℃下攪拌1.5～2.5h，得到所述肌酐衍生物。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述步驟S1包括以下步驟：

步驟S11，將肌酐與鹵代-(CH₂)_n-COO-叔丁酯溶于二甲基甲酰胺中，得到混合溶液；其中，所述肌酐與鹵代-(CH₂)_n-COO-叔丁酯的摩爾比為1～1.2:1；優選在得到所述混合溶液之后，還包括對所述混合溶液進行加熱至恒溫的步驟，更優選所述加熱至恒溫的溫度為80～90℃，所述恒溫的時間大于等于24h；

步驟S12，向所述混合溶液中加入丙烯酸乙酯，得到反應混合物，并對所述反應混合物在0～4℃的低溫下進行攪拌，得到固液混合物；以及

步驟S13，對所述固液混合物依次進行過濾、洗滌純化和真空干燥處理，得到所述2-(CH₂)_n-COO-叔丁酯肌酐。

9.根據權利要求7或8所述的制備方法，其特征在于，當n＝1時，所述肌酐衍生物的制備步驟如下：

10.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述載體與所述肌酐衍生物的連接步驟包括：

步驟S21，制備載體溶液和肌酐衍生物溶液；優選所述載體為血清蛋白、血藍蛋白或甲狀腺球蛋白；

步驟S22，將所述肌酐衍生物溶液滴加至所述載體溶液中，得到滴加混合液；

步驟S23，對所述滴加混合液在2～8℃下攪拌過夜，得到所述肌酐免疫原粗品；以及

步驟S24，對所述肌酐免疫原粗品進行純化，得到所述肌酐免疫原；優選采用透析的方式進行純化。

11.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，在所述步驟S21中，

所述制備載體溶液的步驟包括將載體溶解于0.18～0.25M，pH在8.3～8.8的磷酸緩沖液中，得到所述載體溶液；以及

所述制備肌酐衍生物溶液的步驟包括將所述肌酐衍生物與1-乙基-3-(-3-二甲氨丙基)碳二亞胺和N-羥基硫代琥珀酰亞胺置于二甲基甲酰胺、乙醇以及8～12mM，pH 4.8～5.2的磷酸鉀緩沖液中進行室溫攪拌，得到所述肌酐衍生物溶液；

其中，所述載體與所述肌酐衍生物的質量比為1～1.2:1。

12.一種肌酐檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中含有權利要求1所述的肌酐衍生物和/或權利要求3至6中任一項所述的抗體。