[發(fā)明專利]一種原料乳中乳過氧化物酶的試紙檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410798199.7
• 申請(qǐng)日: 2014-12-19
• 公開（公告）號(hào): CN104406977A
• 公開（公告）日: 2015-03-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姜瞻梅;許曉曦;車紅霞;劉麗麗;辛巖
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/78
• 分類號(hào): G01N21/78
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

1.一種原料乳中乳過氧化物酶的試紙檢測(cè)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

(1)配制試紙浸泡液：分別配制pH值為4.0～6.0的0.1mol/L檸檬酸-0.2mol/L磷酸氫二鈉緩沖溶液、濃度為10-25mmol/L的TMB溶液以及質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％-1.0％的表面活性劑溶液；將上述配制好的三種溶液按照緩沖溶液：TMB溶液：表面活性劑溶液體積比＝30-50:0.5-2:1-3，優(yōu)選按照體積比40:1:2混合混勻，即為試紙浸泡液；

(2)配制過氧化氫(H₂O₂)溶液：配制濃度為0.5-1.0mmol/L的H₂O₂溶液；

(3)試紙的制作：將裁剪好的濾紙條在步驟(1)配制的試紙浸泡液中，浸泡1～3分鐘，完全浸透后，放在平皿上抽真空干燥，制得乳過氧化物酶檢測(cè)試紙，為提高試紙的穩(wěn)定性，干燥后的試紙裁去邊緣0.5cm，將處理好的顯色試紙切割成規(guī)格為0.2-0.8cm×0.2-0.8cm的試紙片，作為反應(yīng)區(qū)黏接在準(zhǔn)備好的PVC膠版上，即制成乳過氧化物酶檢測(cè)試紙；

(4)試紙檢測(cè)：在步驟(3)中制備好的檢測(cè)試紙上，先滴加3μL步驟(2)配制好的H₂O₂溶液，再滴加3μL待檢測(cè)乳樣品，反應(yīng)1-7min后，目測(cè)或使用便攜式光電測(cè)色儀或其他任何可采集樣品顏色信息的儀器，記錄試紙顏色信息變化；

(5)標(biāo)準(zhǔn)的建立：配制濃度范圍在0-25mg/L的標(biāo)準(zhǔn)乳過氧化物酶樣品，按照步驟(4)的方法，采用測(cè)定吸光度值或與之等效的方法，制作標(biāo)準(zhǔn)比色卡，或建立反應(yīng)過程中的顏色變化信息與乳過氧化物酶濃度之間固定的函數(shù)關(guān)系，作為檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)；

(6)檢測(cè)：將步驟(4)采集的顏色變化信息與步驟(5)獲得的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，獲得所測(cè)乳樣中的乳過氧化物酶的濃度。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(1)所述的0.1mol/L檸檬酸-0.2mol/L磷酸氫二鈉緩沖液的pH值為5.0。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(1)所述的TMB溶液濃度為22mmol/L。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(1)所述的表面活性劑為Tween-20、TritonX-100、十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)或十二烷基硫酸鈉(SDS)中的至少一種。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于步驟(1)所述的表面活性劑為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5％的Tween-20或質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.3％的CTAB。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(2)所述的H₂O₂濃度為0.6mmol/L。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(3)所述試紙為快速、中速、慢速定性濾紙或者快速、中速、慢速定量濾紙。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于步驟(3)所述試紙為中速定量濾紙。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(4)中試紙檢測(cè)時(shí)間為反應(yīng)3min。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，檢測(cè)試紙對(duì)原料乳中乳過氧化物酶的最低檢測(cè)濃度為1-2mg/L。