[發明專利]基于滾環擴增技術的檢測左旋色氨酸的方法在審
| 申請號： | 201410789100.7 | 申請日： | 2014-12-17 |
| 公開（公告）號： | CN104450926A | 公開（公告）日： | 2015-03-25 |
| 發明（設計）人： | 趙國杰;關一夫 | 申請（專利權）人： | 中國醫科大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 沈陽智龍專利事務所(普通合伙) 21115 | 代理人： | 宋鐵軍 |
| 地址： | 110122 遼寧省沈陽市沈陽*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 基于 擴增 技術 檢測 色氨酸 方法 | ||
1.一種基于滾環擴增技術的檢測左旋色氨酸的方法，其特征在于包括下述步驟：待檢測的左旋色氨酸與色氨酸阻遏蛋白結合，結合了左旋色氨酸的色氨酸阻遏蛋白通過識別并結合由環形單鏈模板DNA與線性單鏈引物DNA形成的雙鏈上的特異性識別序列，進而抑制DNA聚合酶對單鏈引物DNA的延伸和擴增，滾環擴增反應的抑制程度與左旋色氨酸的濃度成正比，通過制備左旋色氨酸濃度與滾環擴增抑制率的標準曲線，檢測待測樣品對滾環擴增的抑制率，從而確定出待測樣品中的左旋色氨酸含量。
2.按照權利要求1所述的基于滾環擴增技術的檢測左旋色氨酸的方法，其特征在于：所述的待檢測的左旋色氨酸是配制的左旋色氨酸溶液，或是各種提取或制備的生物樣本。
3.按照權利要求1所述的基于滾環擴增技術的檢測左旋色氨酸的方法，其特征在于：所述的色氨酸阻遏蛋白是細菌中調控色氨酸操縱子表達的阻遏蛋白trpR，該蛋白能夠特異性地結合左旋色氨酸，并發生構象變化，提高了結合色氨酸操縱子識別序列的親和力。
4.按照權利要求1所述的基于滾環擴增技術的檢測左旋色氨酸的方法，其特征在于：所述的環形單鏈模板DNA，是作為擴增模板用于滾環擴增的單鏈DNA，并含有色氨酸阻遏蛋白的識別序列。
5.按照權利要求1所述的基于滾環擴增技術的檢測左旋色氨酸的方法，其特征在于：所述的線性單鏈引物DNA，是作為擴增引物用于滾環擴增的線性單鏈DNA，并含有色氨酸阻遏蛋白的識別序列，該線性單鏈引物DNA序列與環形單鏈模板DNA的序列堿基具有序列互補性。
6.按照權利要求1所述的基于滾環擴增技術的檢測左旋色氨酸的方法，其特征在于：所述的DNA聚合酶是用于滾環擴增的DNA聚合酶，包括但不限于phi29?DNA聚合酶。
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