[發明專利]一種從大豆乳清中分離純化大豆凝集素的方法

有效

• 申請號: 201410786151.4
• 申請日: 2014-12-18
• 公開（公告）號: CN104530207B
• 公開（公告）日: 2018-01-09
• 發明（設計）人: 華欲飛;李興飛;孔祥珍;張彩猛;陳業明
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C07K14/42
• 分類號: C07K14/42;C07K1/34
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙)32104
• 代理人: 時旭丹,劉品超

1.一種從大豆乳清中分離純化大豆凝集素的方法，其特征在于步驟如下：

（1）大豆乳清的預處理：將大豆乳清調至pH 4.5-4.8，9500rpm離心30min，除沉淀；再次調至pH 8.0-10.0，9500rpm離心30min，收集上清液，即得大豆乳清液；

（2）大豆乳清蛋白的初級分離：取步驟（1）所得大豆乳清液，調節pH至4.5，在4-30℃下加入硫酸銨至終飽和度為50%，9500rpm離心30min，收集沉淀，繼續向上清中添加硫酸銨至飽和度60%-80%，9500rpm離心30min，收集沉淀；合并兩次沉淀，加入去離子水溶解，使沉淀的質量濃度為1%-10%，截留分子量3500透析脫鹽36-72h，截留液用真空冷凍干燥儀進行干燥，制得含有大豆凝集素和β-淀粉酶的P-7S蛋白；

（3）大豆乳清蛋白與聚陰離子多糖復凝聚：將步驟（2）制備的P-7S蛋白，用去離子水配制終濃度為0.1%-0.4%的P-7S大豆乳清蛋白液，調節pH至7.0，待用；配制0.1%-0.4%的聚陰離子多糖溶液，調節pH至7.0；向P-7S大豆乳清蛋白液中緩慢加入按P-7S大豆乳清蛋白液體積計2.5%-8%的聚陰離子多糖溶液，調節pH至5.0-4.5，4000rpm離心20min，收集沉淀；對上清液再次重復沉淀1次，合并沉淀物，即得大豆凝集素與聚陰離子多糖的復合物；

（4）回收大豆凝集素：將步驟（3）所得大豆凝集素與聚陰離子多糖的復合物懸浮于2-3倍體積的去離子水中，調節pH至7.0-9.0，過超濾膜除糖，收集濾過液；截留分子量3000-4000超濾脫鹽，截留液用真空冷凍干燥儀進行干燥，即得純化的大豆凝集素。

2.根據權利要求1所述的從大豆乳清中分離純化大豆凝集素的方法，其特征在于：所述聚陰離子多糖包括但不限于卡拉膠，硫酸酯化多糖，阿拉伯膠，海藻酸鈉或果膠；其相對分子量范圍為300-2000kD。

3.根據權利要求1所述的從大豆乳清中分離純化大豆凝集素的方法，其特征在于步驟（1）所述大豆乳清的來源：收集常規的大豆分離蛋白生產形成的副產物或實驗室利用脫脂豆粕經醇洗后，提取分離蛋白后所得的大豆蛋白乳清液，進行預處理。

4.根據權利要求3所述的從大豆乳清中分離純化大豆凝集素的方法，其特征在于大豆乳清的預處理步驟為：首先將大豆蛋白乳清液調節pH至4.5-4.8，靜止1-2d，離心，除雜蛋白完全，再調節至pH 8.0-10.0，9500rpm離心30min，收集上清液，即得大豆乳清液。

5.根據權利要求1所述的從大豆乳清中分離純化大豆凝集素的方法，其特征在于： 步驟（4）中超濾膜除糖截留分子量范圍為100-300kD；脫鹽處理包括但不限于透析，超濾，納濾，需保證脫鹽完全。

6.根據權利要求1所述的從大豆乳清中分離純化大豆凝集素的方法，其特征在于：所述pH調節劑為：調節酸性：有機酸：包括但不限于甲酸、乙酸；無機酸：包括但不限于鹽酸，硫酸；調節堿性：包括但不限于氫氧化鈉，氫氧化鉀，碳酸氫鈉。