[發明專利]一種酶法降解幾丁質生產N?乙酰氨基葡萄糖的方法

有效

• 申請號: 201410785604.1
• 申請日: 2014-12-18
• 公開（公告）號: CN104388496B
• 公開（公告）日: 2017-12-22
• 發明（設計）人: 陳可泉;張阿磊;高聰;何珣;歐陽平凱
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: C12P19/26
• 分類號: C12P19/26;C12N9/42;C12R1/01
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司32200
• 代理人: 李紀昌,曹翠珍

1.一種酶法降解幾丁質生產N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1，微生物發酵產幾丁質酶

選產幾丁質酶的菌株作為種子，在37℃、200 rpm下培養得種子液，再以體積分數5%~10%接種量接入裝有產酶發酵培養基的發酵罐，裝液量40~60%，培養溫度24℃~37℃，轉速為200~500 rpm，通氣量1vvm~3vvm，初始pH7.0~8.0，發酵72~96h后收集發酵液；

步驟2，粗酶液的獲得

將步驟1獲得的發酵液低溫高速離心，分離菌體，收集上清液，得到幾丁質酶粗酶液，低溫貯存，備用；

步驟3，濃縮酶液

將步驟2中所得到的幾丁質酶粗酶液，低溫透析濃縮得到濃縮酶液，測粗酶液和濃縮酶液酶活，計算回收率；

步驟4，生產N-乙酰氨基葡萄糖

利用步驟3中獲得的濃縮酶液無菌轉化幾丁質，其中，轉化體系的溫度為25-37℃，攪拌速度為200 rpm，轉化24-72 h，液相法檢測N-乙酰氨基葡萄糖濃度；其中，步驟3，濃縮用變色硅膠或無色硅膠與變色硅膠的混合物；濃縮溫度為4℃，濃縮時間2-12h。

2.根據權利要求1所述的酶法降解幾丁質生產N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于：所述產幾丁質酶的菌株為Chitinolyticbacter meiyuanensis SYBC-H1或Chitinibactersp.GC72。

3.根據權利要求1所述的酶法降解幾丁質生產N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于：步驟4，還包括占轉化體系體積分數為0.1-0.2%的抗生素，所述所述抗生素為卡納或四環素。