[發明專利]一種改進的細胞化學融合方法在審
| 申請號： | 201410783452.1 | 申請日： | 2014-12-16 |
| 公開（公告）號： | CN105754986A | 公開（公告）日： | 2016-07-13 |
| 發明（設計）人： | 周濤;孫衛兵;張躍建 | 申請（專利權）人： | 上海復星長征醫學科學有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/06 | 分類號： | C12N15/06 |
| 代理公司： | 上海新天專利代理有限公司 31213 | 代理人： | 王巍 |
| 地址： | 200444 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 改進 細胞 化學 融合 方法 | ||
1.一種改進的細胞化學融合方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：
(1)將A細胞與B細胞兩株細胞混合置于細胞融合管，向融合管內的細胞團滴加0.5ml50％PEG3000～4000溶液，20秒內完成，邊加邊晃動細胞團，以使細胞團充分接觸融合劑PEG溶液；
(2)接著滴加0.5ml50％PEG1500～2500溶液，40秒內完成，邊加邊晃動融合管，以使細胞團充分接觸融合劑PEG溶液；
(3)細胞團于融合管內靜置30s至1min，用20～30mlDMEM或PRMI1640終止融合。
2.根據權利要求1所述一種改進的細胞化學融合方法，其特征在于，所述細胞選自A與B兩株細胞之間任意組合的融合；所述A細胞和B細胞以2:1-10:1的比列組合。
3.根據權利要求1所述一種改進的細胞化學融合方法，其特征在于，所述A細胞選自Balb/C小鼠B淋巴細胞或昆明小鼠T淋巴細胞；B細胞選自SP2/0骨髓瘤細胞、NS-1骨髓瘤細胞、SP2/0骨髓瘤細胞或X63Ag8.653骨髓瘤細胞。
4.根據權利要求1所述一種改進的細胞化學融合方法，其特征在于，所述步驟(1)PEG3000～4000溶液的pH8.0～8.2，含5％DMSO。
5.根據權利要求1所述一種改進的細胞化學融合方法，其特征在于，所述步驟(2)PEG1500～2500溶液的pH8.0～8.2，含10％DMSO。
6.根據權利要求1所述一種改進的細胞化學融合方法，其特征在于，所述步驟(3)向融合管內加入20～30mlDMEM或PRMI1640溶液終止融合作用。
7.根據權利要求1所述一種改進的細胞化學融合方法，其特征在于，整個融合過程均在37℃水浴中進行。
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