[發明專利]用于丙型肝炎酶聯免疫診斷的無害化陽性對照

有效

• 申請號: 201410779669.5
• 申請日: 2014-12-15
• 公開（公告）號: CN104569403A
• 公開（公告）日: 2015-04-29
• 發明（設計）人: 李銀生;李勇莉;楊杰;周薇;張東芳;胡亞男;劉輝
• 申請（專利權）人: 新鄉醫學院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術領域

本發明涉及酶聯免疫試劑盒，具體地說，涉及一種用于丙型肝炎酶聯免疫診斷的無害化陽性對照及其制備方法與應用。

背景技術

丙型病毒性肝炎(hepatitis?C)是一種主要經血液傳播的疾病，由丙型肝炎病毒(hepatitis?C?virus，HCV)感染引起，呈全球性流行，感染率約3％。我國一般人群感染率為3.2％，長江以北為3.6％，中南和東北地區分別高達3.8％和4.6％。

丙型肝炎的危害在于HCV感染后自發痊愈病例極少，慢性化率可高達60％～85％。其后果是導致肝臟慢性炎癥壞死和纖維化，容易轉化為肝硬化、肝細胞癌(HCC)等終末期肝病，預后差。我國十五科技攻關的資料表明，感染10年和20年以上的肝硬化發生率分別為9.20％和15.29％。世界衛生組織(WHO)對6個國家的11項研究資料表明，感染20年后平均肝硬化發生率為10％～15％，最高可達55％，而HCC的發生率最高可達23％。由于其流行的廣泛性和致病后果，與乙肝一起，被專家稱為比艾滋病還要嚴重的疾病。

HCV屬于黃病毒科(flaviviridae)，其基因組為單股正鏈RNA，易變異，可分為6個基因型及11種以上不同亞型。HCV進入人體后，與宿主染色體整合，宿主可以重復感染不同的基因型或亞型。HCV目前尚不能用常規方法培養，也沒有疫苗和特效藥物，控制其流行以預防為主。

鑒于丙型肝炎對人民健康和生命危害極大，已成為嚴重的社會和公共衛生問題，我國衛生部和中華醫學會于2004年3月推出了《丙型肝炎防治指南》，幾乎同時，美國也發布了《丙型肝炎診斷處理和治療指南》。

《指南》指出目前國內外廣泛使用的主流試劑是第三代抗-HCV酶聯免疫檢測試劑，其基本原理為采用基因工程重組表達的丙肝病毒特異性抗原(Core、E2、NS3、NS4、NS5)包被酶聯板，辣根過氧化物酶(HRP)標記的鼠抗人IgG(抗r鏈)單克隆抗體為示蹤物，TMB顯色系統，間接ELISA方法檢測人血清或血漿中的丙肝病毒IgG抗體。適用于輔助丙型肝炎和篩查丙型肝炎病毒感染者。具有靈敏度高，特異性強，操作簡便，加樣變色，反應快速，反應模式好、重復性好等優點。試劑盒中陽性對照為人HCV陽性血清，材料來源受限，且雖已進行滅活處理仍有潛在的生物危害風險，需按傳染性污染物處理。

發明內容

為了解決現有技術中存在的問題，本發明的目的是提供一種用于丙型肝炎酶聯免疫診斷的無害化陽性對照及其制備方法與應用。解決陽性對照材料的來源受限并避免使用人血清潛在的風險。

為了實現本發明目的，本發明首先提供一種用于丙型肝炎酶聯免疫診斷的無害化陽性對照，所述陽性對照由鼠抗HCV抗體和抗鼠IgG抗體按2:1-1:32的比例混合制成，優選1:4。

所述鼠抗HCV抗體，為可與HCV病毒發生免疫學反應的鼠源IgG抗體，該抗體可以是基因工程表達、化學修飾、通過免疫小鼠、融合后細胞培養等多種途徑獲得。

所述抗鼠IgG抗體，為可與鼠源IgG抗體發生免疫學反應的抗體，該抗體可以是基因工程表達、化學修飾、通過免疫小鼠、融合后細胞培養等多種途徑獲得。

進一步地，所述鼠抗HCV抗體和抗鼠IgG抗體利用免疫學方法制備。

更進一步地，所述陽性對照的制備方法包括如下步驟：

(1)制備鼠抗HCV抗體和抗鼠IgG抗體；

(2)陽性對照的獲得：取鼠抗HCV抗體和抗鼠IgG抗體混合并加入小牛血清和硫柳汞后用生理鹽水稀釋作為陽性對照。

作為優選，所述步驟(2)取鼠抗HCV抗體1mg和抗鼠IgG抗體4mg混合并加入50ml小牛血清和10ml?10％的硫柳汞后用生理鹽水稀釋至1000ml作為陽性對照。

所述鼠抗HCV抗體可為單抗或多抗，在本發明的具體實施方式中，優選所述鼠抗HCV抗體為鼠抗HCV單抗。由于單抗與多抗相比，批間差小，更有利于質控，制備的試劑盒更穩定。

所述抗鼠IgG抗體可為單抗或多抗，在本發明的具體實施方式中，優選所述抗鼠IgG抗體為兔抗鼠IgG多抗。

本發明還提供了含有前述陽性對照的丙型肝炎間接法酶免診斷試劑盒。

進一步地，所述試劑盒還包括：陰性對照、包被板、酶標二抗、樣品稀釋液、洗液等常規試劑盒的組成成分。

作為優選，試劑盒組成：