[發明專利]一種金柑三倍體的育種方法

有效

• 申請號: 201410779338.1
• 申請日: 2015-08-03
• 公開（公告）號: CN104488696A
• 公開（公告）日: 2015-07-29
• 發明（設計）人: 黃桂香;張樹偉
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;A01H1/08
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279
• 代理人: 王正茂

1.一種金柑三倍體的育種方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)四倍體誘變：選擇金柑成熟果實的飽滿種子，去除外種皮，浸泡4-6h后將內種皮剝除，使種胚分離，然后將其置于0.1-0.2％濃度的秋水仙素溶液中浸泡24-48h；

(2)誘變種子的催芽培育：取出浸泡的種子，清洗后先在光照培養箱中催芽發根，保濕，待發根后，剪取1-2cm根尖置于卡諾氏固定液中固定，依次編號，用做染色體倍性檢測；

(3)染色體倍性檢查；

(4)四倍體植株的培育：將步驟(3)中檢查結果為四倍體的種胚編號選出，繼續在沙盆中培養，待幼苗長出真葉，移栽到營養杯中，于溫室內培養至第一次梢成熟后進行移栽；

(5)四倍體果實采收和取種：對移栽后的四倍體植株按照金柑類果樹的常規田間管理技術管理2-3年，待果實成熟即可采收，取種；

(6)四倍體種胚分離培養；

(7)種胚染色體檢測：待種胚生根，進行染色體倍性檢查，檢查方法同步驟(3)；

(8)三倍體苗的培育：將步驟(7)中檢查為三倍體的種胚進行培育，培育的方法同步驟(4)。

2.根據權利要求1所述的金柑三倍體的育種方法，其特征在于，步驟(2)中卡諾氏固定液為按體積比95％乙醇：冰醋酸＝3：1配制而成。

3.根據權利要求1所述的金柑三倍體的育種方法，其特征在于，步驟(3)中所述染色體倍性檢測包括以下步驟：

①預處理：將培養好的根尖剪下1-2cm，用0.002mol/L8-羥基喹啉進行預處理2小時，用0.075mol/L?KCL溶液進行前低滲20min，用1mol/L的鹽酸在60℃水浴鍋中解離7min，再轉入0.075mol/L?KCL中后低滲15min，在蒸餾水中浸泡10min；

②改良卡寶品紅液的配制：取原液C?10-20mL，加45％乙酸溶液80-90mL、山梨醇1.8g，即配成10-20％改良卡寶品紅液；

③染色體制片：將解離好的根尖用蒸餾水沖洗后放到載玻片上，切取約2mm的根尖分生組織，加1滴改良卡寶品紅液染色6-10min，然后在顯微鏡下觀察；

④染色體數目的確定：選擇20-40個完整、染色體分散好和清晰的細胞進行染色體計數，確定染色體數目。

4.根據權利要求3所述的金柑三倍體的育種方法，其特征在于，步驟②中所述原液C是取原液B?45mL，加冰乙酸和福爾馬林各6mL所得；所述原液B是取原液A?10mL，加入90mL的5％石炭酸水溶液所得；所述原液A是取3g堿性品紅溶于100mL的70％乙醇中所得。

5.根據權利要求1所述的金柑三倍體的育種方法，其特征在于，步驟(6)中所述四倍體種胚分離培養包括以下步驟：

①將四倍體金柑種子洗凈，放入燒杯中，加入適量的清水浸種1-2h；

②取出種子，用鑷子輕輕從種子的合點開始除去內外種皮，放入燒杯內，加入600倍的紅汞溶液15-20min進行消毒；

③將已消毒的種子取出，浸入無菌水中30min后，種子的胚將自然松開；

④用鑷子將未分離的種胚分開，置于培養皿中于28℃光溫室中催芽，保濕。