[發明專利]一種提高AA-2G轉化率的環糊精葡萄糖基轉移酶突變體在審
| 申請號： | 201410779194.X | 申請日： | 2014-12-16 |
| 公開（公告）號： | CN104531629A | 公開（公告）日： | 2015-04-22 |
| 發明（設計）人： | 吳敬;宿玲恰;陳晟;熊艷軍 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N9/10 | 分類號： | C12N9/10;C12N15/63;C12P19/60;C12R1/07 |
| 代理公司： | 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人： | 張勇 |
| 地址： | 214122 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 提高 aa 轉化 環糊精 葡萄 糖基轉移酶 突變體 | ||
1.一種環糊精葡萄糖基轉移酶突變體，其特征在于，相對于氨基酸序列為SEQ?ID?NO.1所示的環糊精葡萄糖基轉移酶發生了一個或兩個氨基酸位點的突變；所述突變與環糊精葡萄糖基轉移酶產2-O-α-D-吡喃葡萄糖基抗壞血酸的轉化率相關。
2.根據權利要求1所述的突變體，其特征在于，所述發生突變的氨基酸位點是第228位的賴氨酸或第367位的天冬氨酸。
3.根據權利要求1所述的突變體，其特征在于，所述突變是將第228位的賴氨酸突變為精氨酸，突變體的氨基酸序列是SEQ?ID?NO.2所示的序列。
4.根據權利要求1所述的突變體，其特征在于，所述突變是將第367位的天冬氨酸突變成絲氨酸。
5.根據權利要求1所述的突變體，其特征在于，所述突變是將第228位的賴氨酸突變為精氨酸，同時將第367位的天冬氨酸突變成絲氨酸，得到的突變體命名為K228R/D367S。
6.表達權利要求1-5任一所述突變體的基因工程菌。
7.一種權利要求1所述突變體的制備方法，包括如下步驟：
(1)在Bacillus?stearothermophilus?NO2環糊精葡萄糖基轉移酶氨基酸序列的基礎上確定突變位點；
(2)設計定點突變的突變引物，以攜帶環糊精葡萄糖基轉移酶基因的載體為模板進行定點突變并構建含突變體的質粒載體；
(3)將突變體質粒轉化進宿主細胞；挑選陽性克隆進行發酵培養，并純化環糊精葡萄糖基轉移酶突變體。
8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述質粒載體為pUC系列，pET系列，或pGEX中的任意一種。
9.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述宿主細胞為細菌或真菌細胞；所述的細菌為革蘭氏陰性菌或革蘭氏陽性菌。
10.權利要求1-5任一所述的突變體在AA-2G生產方面的應用。
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