[發(fā)明專(zhuān)利]一種提高AA-2G轉(zhuǎn)化率的環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶突變體

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410779194.X
• 申請(qǐng)日: 2014-12-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104531629A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-04-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳敬;宿玲恰;陳晟;熊艷軍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N9/10
• 分類(lèi)號(hào): C12N9/10;C12N15/63;C12P19/60;C12R1/07
• 代理公司: 北京愛(ài)普納杰專(zhuān)利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 張勇

1.一種環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶突變體，其特征在于，相對(duì)于氨基酸序列為SEQ?ID?NO.1所示的環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶發(fā)生了一個(gè)或兩個(gè)氨基酸位點(diǎn)的突變；所述突變與環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶產(chǎn)2-O-α-D-吡喃葡萄糖基抗壞血酸的轉(zhuǎn)化率相關(guān)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的突變體，其特征在于，所述發(fā)生突變的氨基酸位點(diǎn)是第228位的賴氨酸或第367位的天冬氨酸。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的突變體，其特征在于，所述突變是將第228位的賴氨酸突變?yōu)榫彼幔蛔凅w的氨基酸序列是SEQ?ID?NO.2所示的序列。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的突變體，其特征在于，所述突變是將第367位的天冬氨酸突變成絲氨酸。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的突變體，其特征在于，所述突變是將第228位的賴氨酸突變?yōu)榫彼?，同時(shí)將第367位的天冬氨酸突變成絲氨酸，得到的突變體命名為K228R/D367S。

6.表達(dá)權(quán)利要求1-5任一所述突變體的基因工程菌。

7.一種權(quán)利要求1所述突變體的制備方法，包括如下步驟：

(1)在Bacillus?stearothermophilus?NO2環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶氨基酸序列的基礎(chǔ)上確定突變位點(diǎn)；

(2)設(shè)計(jì)定點(diǎn)突變的突變引物，以攜帶環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因的載體為模板進(jìn)行定點(diǎn)突變并構(gòu)建含突變體的質(zhì)粒載體；

(3)將突變體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)宿主細(xì)胞；挑選陽(yáng)性克隆進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，并純化環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶突變體。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述質(zhì)粒載體為pUC系列，pET系列，或pGEX中的任意一種。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述宿主細(xì)胞為細(xì)菌或真菌細(xì)胞；所述的細(xì)菌為革蘭氏陰性菌或革蘭氏陽(yáng)性菌。

10.權(quán)利要求1-5任一所述的突變體在AA-2G生產(chǎn)方面的應(yīng)用。