[發明專利]試劑盒及其用途

在審

• 申請號: 201410778723.4
• 申請日: 2014-12-15
• 公開（公告）號: CN105779434A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 蔡宇航;錢朝陽;管彥芳;朱紅梅;易鑫;楊玲;朱晨晨
• 申請（專利權）人: 天津華大基因科技有限公司;深圳華大基因科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/68;C12M1/00;C12M1/34;C40B50/06
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

技術領域

本發明涉及生物醫學領域，具體的，涉及試劑盒及其用途，更具體的，本發明涉及一種試 劑盒、試劑盒的用途、一種構建目標區域測序文庫的方法、一種測序方法、一種檢測目標區域 變異的方法和裝置、以及一種對癌癥進行早期篩查的方法和裝置。

背景技術

腫瘤是嚴重威脅人類健康的疾病之一，20世紀70年代以來，我國癌癥發病及死亡率一直 呈上升趨勢，至90年代的20年間，癌癥死亡率上升29.42％，年齡調整死亡率上升11.56％。 2000年癌癥發病人數約180-200萬，死亡140-150萬。惡性腫瘤發病率全國35歲至39歲年齡 段為87.07/10萬，40歲至44歲年齡段幾乎翻番，達到154.53/10萬；50歲以上人群發病占全 部發病的80％以上，60歲以上癌癥發病率超過1％，80歲達到高峰。全國腫瘤死亡率為180.54/10 萬，每年因癌癥死亡病例達270萬例。我國居民因癌癥死亡的幾率是13％[赫捷,陳萬青.(2012). 2012中國腫瘤登記年報.軍事醫學科學出版社:18-28.McBride,D.J.andA.K.Orpana,etal. (2010)."Useofcancer-specificgenomicrearrangementstoquantifydiseaseburdeninplasmafrom patientswithsolidtumors."GenesChromosomesCancer49(11):1062-1069.]。癌癥不僅嚴重影響 勞動人民的健康，而且成為醫療費用上漲的重要因素。我國每年耗費大量資金用于癌癥病人的 醫療費用，帶來巨大的經濟負擔。

癌癥的發生時一個漸進緩慢的過程，如能夠對其做到早期發現，臨床有效治療，到術后復 發監測進行全面控制，可有效的降低其發生率和死亡率，將有著巨大的經濟效益和社會效益， 尋找特異性的腫瘤標志物對早期篩查、術后監控等方面均有重要作用[KayabaH.Tumor markers:essentialdiagnostictoolsforradiologists[J].NipponLgakuHoshasenGakkaiZasshi, 2003,63(4):133-139]。

循環DNA是存在于血液、滑膜液等體液中的細胞外游離DNA，研究發現許多腫瘤患者循 環DNA與正常人相比有很大差異，由于腫瘤細胞凋亡，癌癥患者循環DNA中含有一定的腫 瘤標志物。近年來腫瘤患者血液中循環游離DNA的基因檢測診斷已成為研究熱點，研究顯示 血液中循環腫瘤DNA有可能成為一種新的腫瘤早期診斷及預后判斷的標志物。檢測血液中循 環游離DNA中的腫瘤標志物檢測具有區別于傳統組織腫瘤標志物檢測方式，具有無創、隨時 監控和早期篩查等優勢，并且對循環游離DNA的取樣檢測避免了當前分子診斷需要采集癌組 織作為標本來源的困難，是一種很有潛力的腫瘤標志物。同時將血液腫瘤標志物與臨床檢驗結 合起來，可以輔助腫瘤的早期診斷和實時監控或者為腫瘤的早期診斷或監控提供重要線索，有 可能能成為腫瘤的早期篩查和預后判斷提供重要依據。

目前臨床上對于這些常見高發癌癥的早期診斷和術后監控，擁有許多手段，但大部分方法 在特異性和準確性方面尚不足以滿足臨床檢測的要求。如今高通量測序技術已經在腫瘤檢測中 得到了有效應用，但由于腫瘤發病早期的血漿游離DNA含量較低，而且測序技術本身存在一 定的錯誤率等，采用傳統的測序方法將無法分辨測序錯誤和腫瘤標本中低頻率突變，不利于這 些癌癥的早期診斷和術后監控。因此開發易操作、低損傷、高準確的技術是癌癥早期篩查和術 后監控所急需的。

發明內容