[發明專利]一種胃蛋白酶酶解鑒定大分子膠原蛋白或明膠的方法有效
| 申請號： | 201410766878.6 | 申請日： | 2014-12-11 |
| 公開（公告）號： | CN104535637A | 公開（公告）日： | 2015-04-22 |
| 發明（設計）人： | 段蕊;張俊杰;王永久;蔡學東;張建東 | 申請（專利權）人： | 淮海工學院;連云港金水灣食品有限公司 |
| 主分類號： | G01N27/447 | 分類號： | G01N27/447 |
| 代理公司： | 南京理工大學專利中心 32203 | 代理人： | 朱顯國 |
| 地址： | 222004 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 胃蛋白酶 鑒定 大分子 膠原 蛋白 明膠 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種胃蛋白酶解鑒定大分子膠原蛋白或明膠的方法，其特征在于，步驟如下：
(1)原料溶解：取大分子膠原蛋白或明膠溶于0.1-0.5mol的乙酸中，配成濃度為0.1-10mg/ml的蛋白質溶液；
(2)加熱變性：將蛋白質溶液在30-100℃水浴中加熱；
(3)加入胃蛋白酶：再在蛋白質溶液中加入胃蛋白酶，胃蛋白酶的用量為大分子膠原蛋白或明膠用量的0.1wt％-10wt％；
(4)酶解反應：將加入胃蛋白酶的蛋白質溶液于水浴中反應10-100分鐘，反應溫度為10-60℃；
(5)酶解終止：取反應后的溶液1毫升，加入胃蛋白酶抑制劑5-50微升，終止酶解過程；
(6)制備電泳樣品：在終止酶解過程的蛋白質溶液中，加入濃度為0.1-10mol/L的三羥甲基氨基甲烷溶液10-100微升，充分混勻后于沸水浴中加熱1-10分鐘；
(7)電泳樣品儲存：將沸水浴加熱后的樣品立即冷卻至0℃。
(8)電泳：進行SDS-PAGE電泳試驗。
2.如權利要求1中所述的胃蛋白酶解鑒定大分子膠原蛋白或明膠的方法，其特征在于，步驟(2)中的加熱時間為10-100分鐘。
3.如權利要求1中所述的胃蛋白酶解鑒定大分子膠原蛋白或明膠的方法，其特征在于，步驟(5)中的胃蛋白酶抑制劑采用苯甲基磺酰氟。
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