[發(fā)明專利]一種秋刀魚抗氧化肽及其分離提取方法與應用

在審

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• 申請日: 2014-12-11
• 公開（公告）號: CN104530187A
• 公開（公告）日: 2015-04-22
• 發(fā)明（設計）人: 趙強忠;趙謀明;蘇國萬;劉丹
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C12P21/06;C07K1/20;A23L1/305
• 代理公司: 廣州市華學知識產(chǎn)權代理有限公司 44245
• 代理人: 張燕玲

技術領域

本發(fā)明屬于食品生物技術領域，具體涉及一種秋刀魚抗氧化肽及其分離提取方法與應用。

背景技術

秋刀魚屬于中上層魚類，價格低廉，其肉含有豐富的蛋白質。秋刀魚蛋白及其酶解產(chǎn)物中不僅含有人體所需的必需氨基酸，而且含有大量具有較高營養(yǎng)價值的氨基酸，如His、Tyr和Met等具有抗氧化活性的氨基酸，因此，秋刀魚蛋白可作為制備抗氧化活性肽的良好來源。目前，國內外對秋刀魚的研究主要集中在貯藏和捕撈方面，雖然也有少數(shù)的研究者為了提高秋刀魚的附加值，對其加工副產(chǎn)物進行了研究，并提取了不同部位的有效成分用于工業(yè)中，但也僅僅是集中在魚鱗和內臟兩方面，而對秋刀魚蛋白制備抗氧化肽的研究則很少。

國外在抗氧化活性肽研究方面走在世界的前列，且對海洋魚類蛋白源抗氧化活性肽有廣泛的研究，如Kim?Se-Kwon等已從羅非魚、鮭魚、金槍魚、鱈魚和明太魚中分離出不同分子量與氨基酸結構的抗氧化活性肽段，這些肽類主要通過抑制氧化反應、減少氫過氧化物、螯合金屬離子和清除自由基而體現(xiàn)活性；印度SRM大學分別從竹莢魚、金線魚、翱翔飛魚和黑鯧魚中分離出的四肽、五肽、六肽和七肽，均具有較強的抗氧化活性及顯著的自由基清除活性。而我國對抗氧化活性肽的研究則起步較晚，且對抗氧化活性肽的研究多為植物蛋白。因此，在尋找抗氧化活性肽的進程中，越來越多的國內學者的目光已轉向動物蛋白，尤其是海洋魚類蛋白。近幾年，隨著對海洋生物研究的深入和開發(fā)技術的提高，從海洋魚類蛋白中制備出安全、高效的活性肽已成為當今社會的研究熱點。秋刀魚蛋白富含多種具有營養(yǎng)價值的氨基酸，目前這些氨基酸尚未得到充分利用，造成資源的浪費。

發(fā)明內容

為了解決以上現(xiàn)有技術的缺點和不足之處，本發(fā)明的首要目的在于提供一種秋刀魚抗氧化肽。

本發(fā)明的另一目的在于提供上述秋刀魚抗氧化肽的分離提取方法。

本發(fā)明的再一目的在于提供上述秋刀魚抗氧化肽的應用。

本發(fā)明目的通過以下技術方案實現(xiàn)：

一種秋刀魚抗氧化肽，所述抗氧化肽具有Ser-Gly-Ala-Ala-Met的氨基酸序列。

上述秋刀魚抗氧化肽的分離提取方法，包括以下操作步驟：

(1)將秋刀魚去頭及內臟，血水清洗干凈后絞成魚糜，將魚糜與水按質量比為1：(2～4)混合，加入蛋白酶酶解4～12h，滅酶，冷卻后離心取上清液，得到秋刀魚蛋白酶解產(chǎn)物(PSPHs)；

(2)用大孔吸附樹脂對PSPHs進行分離，依次用蒸餾水及體積分數(shù)為10％～29％、30％～49％、50％～69％和70％～90％的乙醇溶液梯度洗脫，收集30％～49％乙醇溶液洗脫的組分，冷凍干燥，得到肽粉I；

(3)將肽粉I用葡聚糖凝膠色譜柱分離，以蒸餾水為流動相進行洗脫，按洗脫的時間先后依次得到三個組分，收集最后洗脫的組分，冷凍干燥，得到肽粉II；

(4)將肽粉II溶于水后，用反相高效液相色譜柱進一步純化，依次用乙腈的體積百分比分別為2％～9％、10％～19％、20％～39％和40％～55％的乙腈-三氟乙酸水溶液為流動相進行洗脫，收集10％～19％的乙腈-三氟乙酸水溶液洗脫的組分，冷凍干燥，即得秋刀魚抗氧化肽。

步驟(1)中所述的蛋白酶為風味蛋白酶或胰酶中的一種或兩種，蛋白酶添加量為500～1500U/g蛋白；所述酶解的pH為6.5～8.5，酶解溫度為45～55℃。

步驟(1)中所述的滅酶是指在85～100℃下保溫10～30min；所述的離心是指在1500～4000g的離心力下離心10～30min。

步驟(2)中所述的大孔吸附樹脂優(yōu)選HP-20樹脂。

步驟(3)中所述的葡聚糖凝膠色譜柱優(yōu)選Sephadex?G-25葡聚糖凝膠色譜柱。

步驟(4)中所述的反相高效液相色譜柱優(yōu)選C18柱；所述三氟乙酸水溶液是指體積分數(shù)為0.1％～0.2％的三氟乙酸水溶液。

上述秋刀魚抗氧化肽在食品、化妝品和醫(yī)藥領域中的應用。

通過本發(fā)明的制備方法及所得到的產(chǎn)物具有如下優(yōu)點及有益效果：

(1)本發(fā)明的秋刀魚抗氧化肽為短肽，分子量為435Da，易被人體吸收，且具有較強的抗氧化活性，其氧自由基吸收能力為谷胱甘肽的4.47倍，為粗肽的10倍左右，安全、無毒和高效的秋刀魚抗氧化肽可以代替一些化學合成抗氧化劑應用到食品工業(yè)中提高食品穩(wěn)定性；

(2)本發(fā)明利用酶解技術及特定分離提純技術得到一種高活性抗氧化肽，不僅提高秋刀魚產(chǎn)業(yè)的經(jīng)濟效益，而且提高了秋刀魚資源的利用率和附加值；