[發明專利]一種用于治療肺癌的中藥克方10個指標成分的質量控制方法

無效

• 申請號: 201410764397.1
• 申請日: 2014-12-12
• 公開（公告）號: CN104458960A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 尹蓮;張旭;吳芳
• 申請（專利權）人: 南京中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

一、技術領域

本發明涉及中醫藥技術領域，具體地說是一種用于治療肺癌的中藥克方10個指標成分的質量控制方法。

二、背景技術

肺癌是嚴重威脅人類生命健康的惡性腫瘤，近年來發病率已呈明顯上升的趨勢，全球每年有超過100萬人死于肺癌。中醫中藥抑制或殺傷腫瘤細胞及術后調理、減輕放療及化療不良反應、改善患者癥狀和體征、提高生活質量等方面發揮了重要作用。克金巖方(克方)是抗肺癌臨床經驗方，由冬瓜子、法夏、膽南星、山茨菇、貓爪草、金蕎麥、魚腥草、仙鶴草、蘇木、紅花、沙參、玉竹、麥冬藥物組成【尹蓮，張旭,葉麗紅.一種抗肺癌A549細胞增殖的中藥提取物及其制備方法，ZL200810195060.8】。多年來在抗肺癌臨床應用中取得了很好的療效，治愈肺癌病人無數，并有抗肺癌療效及靶向作用機制方面的優勢，目前已研制成抗肺癌中藥復方制劑。

但目前中藥材和制劑缺乏普適性的質量控制方法，嚴重制約了我國中藥新藥的開發及產業的發展。在中藥制劑多指標成分測定的實際過程中，其無法逾越的瓶頸是缺乏部分標準品，這樣就直接限制了用常規外標法或內標法實現多指標質量控制的設想。克方中抗肺癌效應物質基礎已有系統研究基礎，黃酮活性成分已明確【董靜,尹蓮,張旭，等.周氏克金巖方抗肺癌A9細胞有效部位I成分分析研究，中國中醫藥信息雜志，2009，16(11)：40-42；孫怡,趙沁,尹蓮，等.周氏克金巖方提取部位抗A549細胞增殖的研究，南京中醫藥大學學報，200925(2)：107-109.】，但該制劑及相關藥材均無多指標成分的質量控制方法。

因此，選擇克方中抗肺癌作用明確、能代表各藥材特征成分的10個黃酮成分為指標成分，建立質量控制方法，可實行克方及制劑質量控制的目的。

三、發明內容

本發明的目的在于提供一種用于治療肺癌中藥克方10個指標成分的質量控制方法。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：

一種用于治療肺癌的中藥克方10個指標成分的質量控制方法，步驟如下：

(1)克方樣品制備：

a.克方藥材：精密稱取貓爪草5－15份、金蕎麥5－15份、魚腥草5－15份、仙鶴草5－15份、冬瓜子5－15份、山茨菇10－20份、蘇木10－20份、紅花10－20份、法半夏10－20份、膽南星5－15份、沙參5－15份、玉竹5－15份、麥冬5－15份共20-40g粉碎，加50％-80％乙醇100-400ml，加熱回流提取0.5-1.5h，過濾，提取3次，濾液減壓濃縮至40-80ml，取5－10mL旋干，用70％甲醇溶解定容至25mL，過0.45μm濾膜，作為克方藥材供試品溶液；

b.克方制劑：取以上克方藥材提取、精制、濃縮，再加適量糊精輔料加工成顆粒劑，精密稱取克方顆粒10-20g，研碎，加70％甲醇100-200ml，超聲提取0.5-1.0h，過濾，提取2次，濾液減壓濃縮至20-40ml，取5-10ml用70％甲醇定容至25ml，過0.45μm濾膜，作為克方制劑供試品溶液；

(2)對照品溶液制備：

精密稱取羥基紅花黃色素35.30mg、巴西蘇木素12.42mg、兒茶素0.46mg、金絲桃苷0.408mg、蘆丁0.55mg、異槲皮苷0.34mg、木犀草苷0.11mg、槲皮苷1.22mg、芹菜素-7-O-葡萄糖苷0.14mg、槲皮素0.24mg?10種對照品置于10mL量瓶中，加70％甲醇使溶解并定容至刻度，制得混合對照品供試液，于4℃保存備用；

(3)色譜條件：

色譜柱：Diamonsil?C18柱(4.6×250mm，5μm)；流動相：A-乙腈，B-1.5％冰醋酸水溶液，梯度洗脫：0～10min?4～5％A,10～15min?5～10％A,15～20min?10～15％A,20～30min?15％A,30～32min?15～18％A,32～55min?18％A,55～60min?18～32％A,60～65min32～33％A,65～75min?33％A,75～85min?33～35％A,85～90min?35～37％A；檢測波長：280nm、350nm；流速：1.0mL·min^-1；柱溫：30℃；進樣量：20μL；分析時間：90min；

(4)校正因子fkm的計算：