[發明專利]一種用于治療肺癌的中藥克方10個指標成分的質量控制方法

無效

• 申請號: 201410764397.1
• 申請日: 2014-12-12
• 公開（公告）號: CN104458960A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 尹蓮;張旭;吳芳
• 申請（專利權）人: 南京中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

1.一種用于治療肺癌的中藥克方10個指標成分的質量控制方法，步驟如下：

克方樣品制備：

a.?克方藥材：精密稱取貓爪草5－15份、金蕎麥5－15份、魚腥草5－15份、仙鶴草5－15份、冬瓜子5－15份、山茨菇10－20份、蘇木10－20份、紅花10－20份、法半夏10－20份、膽南星5－15份、沙參5－15份、玉竹5－15份、麥冬5－15份共20-40g粉碎，加50%-80%?乙醇100-400ml，加熱回流提取0.5-1.5h，過濾，提取3次，濾液減壓濃縮至40-80?ml，取5－10?mL旋干，用70%甲醇溶解定容至25mL，過0.45μm濾膜，作為克方藥材供試品溶液；

b．克方制劑：取以上克方藥材提取、精制、濃縮，再加適量糊精輔料加工成顆粒劑，精密稱取克方顆粒10-20g，研碎，加70%?甲醇100-200ml，超聲提取0.5-1.0h，過濾，提取2次，濾液減壓濃縮至20-40?ml，取5-10?mL用70%甲醇定容至25mL，過0.45μm濾膜，作為克方制劑供試品溶液；

混合對照品溶液制備：

精密稱取羥基紅花黃色素35.30mg、巴西蘇木素12.42mg、兒茶素0.46mg、金絲桃苷0.408mg、蘆丁0.55mg、異槲皮苷0.34mg、木犀草苷0.11mg、槲皮苷1.22mg、芹菜素-7-O-葡萄糖苷0.14mg、槲皮素0.24mg?10種對照品置于10?mL量瓶中，加70%甲醇使溶解并定容至刻度，制得混合對照品供試液，于4℃保存備用；

（3）色譜條件：?

色譜柱：Diamonsil?C18柱（4.6×250mm，5μm）；流動相：A-乙腈，B-1.5%冰醋酸水溶液，梯度洗脫：0~10min?4~5%A,?10~15min?5~10%A,?15~20min?10~15%A,?20~30min?15%A,?30~32min?15~18%A,?32~55min?18%A,?55~60min?18~32%A,?60~65min?32~33%A,?65~75min?33%A,?75~85min?33~35%A,?85~90min?35~37%A；檢測波長：280nm、350nm；流速：1.0mL·min^-1；柱溫：30℃；進樣量：20μL；分析時間：90min；

（4）校正因子fkm的計算：

混合對照品溶液進樣10，5，2，1，0.5μL，用高效液相色譜測定色譜圖并進行峰面積積分，選取槲皮素為內標化合物，分別計算兒茶素、巴西蘇木素、羥基紅花黃色素A、蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷、木犀草苷、槲皮苷及芹菜素-7-O-葡萄糖苷的相對校正因子fkm；

(5)?克方樣品中10個指標成分的質量測定：

a.?取克方供試液注入高效液相色譜儀，按以上色譜條件測得色譜圖；

b.?以槲皮素為內標，按回歸方程計算槲皮素質量，槲皮素的回歸方程為：Y=1.2×10⁶X-5165.8（280nm檢測波長）、Y=2.6×10⁶X-2700.4（350nm檢測波長）；

c.?兒茶素、巴西蘇木素、羥基紅花黃色素A、蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷、木犀草苷、槲皮苷及芹菜素-7-O-葡萄糖苷的質量按公式計算；

公式為：Wm=(Wk×Am)/(fkm×Ak)

式中Ak為槲皮素內標物峰面積，Wk為槲皮素內標物質量；Am為被測組分m的峰面積，Wm為被測組分m的質量，fkm為兒茶素、巴西蘇木素、羥基紅花黃色素A、蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷、木犀草苷、槲皮苷及芹菜素-7-O-葡萄糖苷的校正因子；

d.?克方藥材或制劑中槲皮素、兒茶素、巴西蘇木素、羥基紅花黃色素A、蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷、木犀草苷、槲皮苷及芹菜素-7-O-葡萄糖苷的質量分別為0.0122~0.0456?mg/g、?0.0112~0.0922?mg/g、?0.1043~1.5024?mg/g、?0.6930~1.4242?mg/g、?0.0114?~0.1267mg/g、?0.0122~0.0851mg/g、?0.0105~?0.0775mg/g、?0.0011~0.0315mg/g、0.0314~0.4325?mg/g、?0~0.0082?mg/g。