[發明專利]一種土壤抗生素污染的診斷方法

有效

• 申請號: 201410764095.4
• 申請日: 2014-12-12
• 公開（公告）號: CN104531835A
• 公開（公告）日: 2015-04-22
• 發明（設計）人: 楊肖娥;劉娣;盧玲麗;馮英;李廷強
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12Q1/52
• 分類號: C12Q1/52;C12Q1/42;C12Q1/32
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

1.一種土壤抗生素污染的診斷方法，包括以下步驟：

(1)將肝細胞接種到一組抗生素濃度呈梯度分布的培養基中培養，培養一段時間后檢測培養基中肝細胞分泌的酶的活性；

(2)建立培養基中抗生素濃度與所述酶的活性之間的關系曲線；

(3)將肝細胞接種到含待測土壤浸提液的培養基中培養，培養一段時間后檢測相應酶的活性，根據關系曲線計算得到待測土壤中抗生素的濃度；

所述酶為乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶或丙氨酸氨基轉移酶。

2.根據權利要求1所述的土壤抗生素污染的診斷方法，其特征在于，所述肝細胞為人體肝細胞HL-7702。

3.根據權利要求1所述的土壤抗生素污染的診斷方法，其特征在于，所述抗生素為四環素或青霉素。

4.根據權利要求1所述的土壤抗生素污染的診斷方法，其特征在于，采用線性回歸或一元二次方程擬合建立關系曲線。

5.根據權利要求4所述的土壤抗生素污染的診斷方法，其特征在于，所述關系曲線為：

y₁＝0.1258x₁+146.67，R²＝0.9591，0≤y₁≤2500；

y₁＝0.0002x₂+0.9604，R²＝0.8757，0≤y₁≤2500；

y₁＝0.0091x₃+2.685，R²＝0.9677，0≤y₁≤500；

y₂＝0.1009x₁+69.717，R²＝0.8727，0≤y₂≤2500；

y₂＝0.0003x₂+0.9681，R²＝0.9135，0≤y₂≤2500；

y₂＝0.0025x₃+3.1936，R²＝0.9552，0≤y₂≤2500；

y₁為四環素的濃度，單位為μg·L^-1；y₂為青霉素的濃度，單位為μg·L^-1；x₁為乳酸脫氫酶的活性，單位為U/L；x₂為堿性磷酸酶的活性，單位為Kim?unit/100ml；x₃為丙氨酸氨基轉移酶的活性，單位為卡門氏單位；R²為相關系數。

6.根據權利要求1所述的土壤抗生素污染的診斷方法，其特征在于，步驟(1)和(3)中細胞培養時間為不少于4小時。

7.根據權利要求1所述的土壤抗生素污染的診斷方法，其特征在于，所述培養基為無血清DMEM高糖培養基。

8.根據權利要求1所述的土壤抗生素污染的診斷方法，其特征在于，所述肝細胞的接種密度為1×10⁵～1×10⁶個/ml。

9.根據權利要求1所述的土壤抗生素污染的診斷方法，其特征在于，所述肝細胞的培養條件：溫度為37℃，CO₂體積濃度為5％。

10.根據權利要求1所述的土壤抗生素污染的診斷方法，其特征在于，所述土壤浸提液稀釋50～100倍。