[發明專利]一種功能植物乳桿菌及其復合菌粉的制備

在審

• 申請號: 201410763406.5
• 申請日: 2014-12-15
• 公開（公告）號: CN104560790A
• 公開（公告）日: 2015-04-29
• 發明（設計）人: 謝遠紅;張紅星;劉慧;于立娟;金君華;段慧霞;熊利霞;高秀芝
• 申請（專利權）人: 北京農學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/14;A61P3/06;C12R1/25;C12R1/07;C12R1/645
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技術領域

本發明涉及一種具有降膽固醇能力的植物乳桿菌植物亞種，并以植物乳桿菌菌粉為主要原料，添加納豆粉及紅曲粉，制備一種具有降膽固醇功能的復合菌粉，屬于功能食品及微生態制劑應用領域。

背景技術

血清膽固醇水平偏高是引發心血管疾病的主要危險因素，本發明所采用的植物乳桿菌植物亞種、納豆芽孢桿菌、紫紅曲霉均為可食用的益生菌，由這三種菌株制成的功能性復合菌粉，能夠預防高膽固醇血癥，對人體具有很好的保健效果。

益生乳酸菌能夠促進蛋白質等營養物質的吸收，產生維生素B族等大量有益物質，改善人體腸道功能，恢復人體腸道內菌群平衡，增強人體免疫力，抗腫瘤，還具有降膽固醇、降血脂、降血壓作用；能消除體內自由基，具有抗衰老的作用。

納豆芽孢桿菌可改變人體腸道菌群生態，幫助正常消化道機能，維持體內生理環境。分泌各種酶和維生素，促進小腸黏膜細胞的增殖。此外，納豆芽孢桿菌在利用大豆蛋白生長時，產生納豆激酶和維生素K，具有治療三高(高血糖，高血壓，高血脂)和溶解血栓的作用。

紅曲的代謝產物中具有能降低血清膽固醇的天然他汀類物質，特別是含有洛伐他汀(一種具有顯著血脂調節能力的活性物質即Monacolin?K)，同時還能產生許多對人體有益的成分，如必需氨基酸、不飽合脂肪酸等。大量研究發現，紅曲具有非常強大的降低總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、血清甘油三酯、動脈粥樣硬化指數，升高高密度脂蛋白膽固醇的顯著綜合療效。服用紅曲安全性高、副作用小，并能有效的治療冠心病、腦中風等心腦血管疾病及與高血脂相關的疾病，如糖尿病、腎病綜合征及脂肪肝，被認為是當前最有前途的降脂物質。

目前，國內外對功能性植物乳酸菌有很多研究，吉林省農業科學院申請的“一株具有降膽固醇功能的植物乳桿菌及其應用”(CN201010034128.1)公開了一株具有降膽固醇能力的植物乳桿菌菌株。天津科技大學申請的“一種降血脂及調節腸道菌群的益生菌制劑的制備方法”(CN200910069088.1)對Kefir源植物乳桿菌進行發酵、凍干，并介紹了其具有降膽固醇能力和調節腸道菌群的生理功能。此外，還有一些專利文獻涉及了降膽固醇能力的植物乳桿菌，但都尚未涉及納豆和紅曲復配，制成功能性菌粉。據此，本發明主要利用一株具有降膽固醇能力及較強的耐酸性、耐膽鹽能力的植物乳桿菌植物亞種，與納豆芽?孢桿菌制備的納豆菌粉和紫紅曲霉制備的紅曲粉，制備一種具有降膽固醇功能的復合菌粉。

發明內容

本發明目的是提供一種具有降膽固醇能力的植物乳桿菌植物亞種菌粉，與納豆芽孢桿菌制備的納豆粉和紫紅曲霉制備的紅曲粉復配，制備一種具有降膽固醇功能的復合菌粉。

1、植物乳桿菌植物亞種菌粉的制備方法

本發明涉及的一株植物乳桿菌植物亞種(Lactobacillus?plantarum?subsp.plantarum)Zhang-LL，已于2012年12月04日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所)，其保藏號為：CGMCC?No.6936。其特征在于MRS培養基，培養2d，菌體形態：菌體短桿狀，0.5×1.33～2.0μm，單個，成對或呈短鏈狀排列，不生芽孢，革蘭氏陽性。

植物乳桿菌植物亞種菌粉的制備步驟：

(1)菌種活化：將活化擴大培養后的植物乳桿菌植物亞種Zhang-LL菌種，接種到2L改良MRS培養基中，利用5L全自動發酵罐進行高密度發酵，溫度控制在34℃，發酵液pH?6.5，攪拌轉速為150r/min，發酵20～28h，得到發酵液。

上述方法中，改良MRS液體培養基配方：胰蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母浸粉5.0g，檸檬酸三銨2.0g，葡萄糖20.0g，吐溫80?1.0mL，乙酸鈉5.0g，磷酸氫二鉀2.0g，硫酸鎂0.5g，硫酸錳0.25g，水1L，pH6.5，0.1Mpa滅菌15min。

(2)收集菌泥：將發酵液置于離心機中，于4℃、8000r/min離心10min，收集得到菌泥。

(3)預凍和冷凍干燥：將植物乳桿菌植物亞種菌泥與1/10原發酵液體積的保護劑混合，凍干保護劑成分為15％脫脂乳粉，混合均勻后，得到濃縮發酵劑；將濃縮發酵劑于-35℃冰箱中預凍13h后，得到預凍活菌制劑，利用真空冷凍干燥機將預凍活菌制劑于-55℃、真空度0.08mBar的條件下，凍干48h至完全干燥狀態，獲得植物乳桿菌植物亞種凍干菌粉(活菌制劑)。

2、納豆芽孢桿菌納豆粉的制備方法