[發明專利]一種復合菌劑及其制產纖維素酶的方法

在審

• 申請號: 201410759440.5
• 申請日: 2014-12-11
• 公開（公告）號: CN104403980A
• 公開（公告）日: 2015-03-11
• 發明（設計）人: 王小芬;崔宗均;劉晶晶;王小娟;袁旭峰;朱萬斌
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/14;C12N9/42;C12R1/145;C12R1/01;C12R1/645
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種復合菌劑，其特征在于，是由緩纖維梭菌、解木聚糖擬桿菌、噬纖維菌、灰蓋鬼傘菌分別接種于培養基，發酵培養后將發酵液混合得到的發酵混合液；

其中所述發酵混合液中緩纖維梭菌、解木聚糖擬桿菌、噬纖維菌、灰蓋鬼傘菌的菌落形成單位數目比為20-25：15-20：15-20：40-50，菌落形成單位數目為0.8×10⁶-1.2×10⁶CFU；

所述發酵培養條件為：33-37℃靜止培養7d。

2.根據權利要求1所述的復合菌劑，其特征在于，所述緩纖維梭菌(Clostridium?lentocellum)，其保藏編號為ATCC?49066；

所述解木聚糖擬桿菌(Bacteroides?xylanisolvens)，其保藏編號為DSM?18836；

所述噬細胞菌(Cytophaga?sp.)，其保藏編號為ATCC13125；

所述灰蓋鬼傘菌(Coprinus?cinereus)，其保藏編號為CGMCC?NO.4051。

3.根據權利要求1所述的復合菌劑，其特征在于，所述培養基為Mandels培養基，其配方如下：

同時在培養基中添加小麥秸稈作為唯一的碳源，長度為2-3cm，添加量為前述培養基總質量的1％。

4.根據權利要求1-3任一所述的復合菌劑，其特征在于，所述復合菌劑還可制成固體劑型，所述固體復合菌劑是由上述發酵混合液與載體按0.8×10⁶-1.2×10⁶CFU：(1－10)g比例配制而得；優選所得發酵混合液與載體按1×10⁶CFU：5g比例配制。

5.根據權利要求4所述的復合菌劑，其特征在于，所述載體為麥飯石和/或秸稈粉。

6.一種制產纖維素酶的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)將秸稈粉碎與培養基混合，115-120℃滅菌15-30min，冷卻；

2)將權利要求1-5任一所述的復合菌劑接種到步驟1)所得體系中，每天攪拌一次，30-35℃培養7-10天，將發酵產物真空干燥，得到固態纖維素復合酶。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述秸稈為水稻、小麥、玉米或其它木質纖維素材料，長度＜1mm。

8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述培養基配方為(g/l)：

9.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述秸稈與培養基混合比例為5-10:15-20(g/ml)，優選為10:15(g/ml)。

10.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述復合菌劑接種量為每千克培養基中菌落形成單位數目為0.16×10⁶-0.24×10⁶CFU。