[發明專利]一種高嶺土固定化GY2B菌的制備方法及其應用

在審

• 申請號: 201410757077.3
• 申請日: 2014-12-10
• 公開（公告）號: CN104531666A
• 公開（公告）日: 2015-04-22
• 發明（設計）人: 吳平霄;李躍武;黨志;朱能武
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C02F3/34;C02F101/34
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 張燕玲

技術領域

本發明屬于微生物化固定技術領域，具體涉及一種高嶺土固定化GY2B菌的制備方法及其應用。

背景技術

苯酚是一種重要的具有特殊氣味兼腐蝕性的有機原料，在醫藥、樹脂、滅菌劑等多方面被廣泛應用。苯酚對人體、環境中的大氣和水體都會產生極大威脅。與人體直接接觸輕則會導致體內、體外的粘膜、皮膚腐蝕，重則導致中樞神經處于抑制狀態、對外界刺激反應慢以及肝、腎功能損害，急性中毒甚至致命。不僅會污染河流湖泊，破壞生態景觀，抑制水生動植物生長，甚至導致死亡，更能夠隨食物鏈遷移而危害人體健康，不僅有使蛋白質變性、長期飲用導致苯酚積累而引發慢性中毒的低濃度苯酚污染影響人們正常生命活動，更有使蛋白質凝固、引起肌體組織損傷壞死、導致急性中毒的高濃度苯酚污染威脅生命安全。加之極高的常見性和極強的流動性，苯酚被列入129種有毒污染物和有限污染物，其處理受到重大關注。

含苯環有機物的如PAHs，苯酚等的微生物降解已成為國內外污染環境修復的重要手段甚至首選的方法，生物處理法具有成本低廉、對環境干擾輕微、處理形式多樣、處理徹底等優點。GY2B高效降解菌屬鞘氨醇單胞菌，被篩選并證實對包括菲等多種多環芳烴具有較高或一定的降解能力。降解通過細菌的攝入轉化，能有效開環降解，使多種帶苯環的有機污染物轉化成簡單無害或易處理的物質。除菲等芳烴化合物外，GY2B菌對苯酚也可觀的降解能力。現階段，對有機污染物的降解多停留在單菌的投加和條件的維穩，菌種降解效率的保證和提高也多涉及在生物增強劑、體系適宜條件、菌屬濃度、和部分協同作用。

發明內容

為解決現有技術中游離GY2B菌降解過程中適應期較長以及對復雜惡劣環境下調節能力差等缺點和不足之處，本發明的首要目的在于提供一種制備高嶺土固定化GY2B菌的方法，該方法能顯著提升GY2B菌屬降解效率和速率，并在一定惡劣環境下維持降解能力。

本發明的另一目的在于提供上述方法獲得的高嶺土固定化GY2B菌。

本發明的再一目的在于提供上述高嶺土固定化GY2B菌的應用。

為實現上述發明目的，本發明采用如下技術方案：

一種高嶺土固定化GY2B菌的制備方法，包括以下步驟：

(1)將GY2B菌活化培養形成菌體，將菌體在含苯酚的富集培養液中擴大培養得到濃菌液，再用無菌生理鹽水離心洗滌濃菌液得到菌體，之后將洗得的菌體懸于無菌生理鹽水中得到菌懸液；

(2)將滅菌處理后的高嶺土溶解于無菌MSM培養液中形成懸濁液，然后按接種量2～8％加入步驟(1)得到的菌懸液，吸附固定1～4小時，制得所述高嶺土固定化GY2B菌。

優選的，步驟(1)所述GY2B菌活化培養的具體操作為：將平板儲存的GY2B菌落挑1～2環至含苯酚濃度50～200mg/L的無菌MSM培養液中震蕩培養，搖床條件為避光25～35℃、100～200r/min；8～16小時后取1～2mL菌液至新的含苯酚濃度50～200mg/L的無菌MSM培養液中接代培養，待8～16小時生長良好時再取1～2ml菌液至新的含苯酚濃度50～200mg/L的無菌MSM培養液中再次接代培養，按此重復接代培養2～5次(即把接待培養的步驟按相同條件重復進行2～5次)即得到具有穩定降解苯酚能力的GY2B菌體，涂平板保存。

優選的，步驟(1)中將菌體在含苯酚濃度50～200mg/L的富集培養液中擴大培養8～16h得到所述濃菌液。

步驟(1)中將菌體在含苯酚的富集培養液中擴大培養，是為了解決在無機鹽培養液中培養得到菌體較少的缺陷，并且在制成濃菌液的同時保持其降解性能。

優選的，步驟(1)中得到的菌懸液，于紫外分光光度計600nm處調節濃度，使其吸光度值為A＝0.8～1.5。所得的菌懸液保存在2～10℃冰箱備用。

優選的，步驟(1)所述離心洗滌具體條件為：離心溫度為2～10℃，離心轉速為6000～12000r/min，離心時間為10～20分鐘，離心洗滌次數為2～5次。

優選的，步驟(2)所述高嶺土的滅菌處理具體操作為：將高嶺土于100～150℃下蒸汽滅菌15～60min，然后于80～150℃烘干分散10～30min。滅菌后的高嶺土放于紫外光照射下冷卻備用。

優選的，步驟(2)所述高嶺土目數為100～300目。

優選的，步驟(2)所述吸附固定具體條件為：在恒溫震蕩培養箱中進行，儀器參數為100～200r/min、25～35℃以及避光。

上述方法獲得的高嶺土固定化GY2B菌。

上述方法獲得的高嶺土固定化GY2B菌在處理含苯酚廢水中的應用。